不同類型炎癥中C-反應(yīng)蛋白水平與基因型差異及其意義.pdf

1、目的：CRP(C-反應(yīng)蛋白)是肝臟合成的一種與炎癥有關(guān)的急性時相蛋白，是最敏感的炎癥指標(biāo)之一，健康人血液中的含量甚微(<3mg/L)，當(dāng)機(jī)體處于炎癥或組織損傷時，血液中的CRP水平在數(shù)小時內(nèi)急劇增高，最高可達(dá)正常水平的千倍(1000mg/L)以上。當(dāng)炎癥緩解時，CRP水平也隨著病情好轉(zhuǎn)逐漸下降，恢復(fù)至正常水平。 根據(jù)Pathologic Basis of Disease的標(biāo)準(zhǔn)，炎癥是指“各種內(nèi)源性和外源性刺激引起的細(xì)胞和組織的損

2、傷，同時伴有血管反應(yīng)的結(jié)締組織的復(fù)合性反應(yīng)”。本研究旨在通過檢測不同類型炎癥中CRP異常升高水平的差異，CRP異常升高持續(xù)時間的差異，及達(dá)CRP的峰值時人數(shù)構(gòu)成的差異，來探討CRP在感染性炎癥(病原微生物直接感染所致)與非感染性炎癥(指與超敏反應(yīng)有關(guān)的炎癥和自身免疫性炎癥)中升高的特點(diǎn)，為揭示炎癥的發(fā)生和演變規(guī)律及臨床治療提供理論依據(jù)；通過檢測不同CRP基因型人群CRP升高水平的差異，來探討基因在CRP升高方面所起的作用。 方

3、法：選取唐山工人醫(yī)院2002年1月1日-2004年12月31日3年間收治的患有感染性炎癥(其中急性扁挑體炎22例；急性肺炎支氣管炎51例；慢性支氣管炎16例；腎盂腎炎5例；腦膜炎4例；腸炎12例)以及免疫性炎癥(其中類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎8例；皮肌炎5例；干燥綜合征4例；變應(yīng)性亞敗血癥29例；過敏性紫癜33例；系統(tǒng)性紅斑狼瘡9例；腎小球腎炎16例；慢性腎小球腎炎6例)的病人二組。每組各110例，各組男：女為1：1，年齡14-82歲。健康對照組8

4、0例，男：女為1：1，年齡12-75歲。所有研究對象均為漢族，無血緣關(guān)系。利用免疫比濁法檢測兩組炎癥患者血清中高敏CRP含量。應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)一限制性片段長度多態(tài)性(PCR-RFLP)核苷酸分型技術(shù)檢測兩組炎癥患者與健康對照組C-反應(yīng)蛋白(CRP)的1059 G/C基因多態(tài)性，獲得結(jié)果，操作過程如下：抽取外周靜脈血5ml，枸櫞酸鈉抗凝：采用低滲溶血法獲得白細(xì)胞，以常規(guī)酚/氯仿抽提法提取DNA，TE溶解保存。然后應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)

5、進(jìn)行基因擴(kuò)增。應(yīng)用的引物(北京賽百盛基因技術(shù)有限公司)，序列如下：上游引物5’-GAT CTG TGT GTG ATC TGA GAA ACC TCT-3'，下游引物5’-GAG GTA CCA GAG ACA GAG ACG TG-3’PCR反應(yīng)體系50ul，基因組DNA 100ng，10*PCR緩沖液5ul， 1 ul dNTP，3單位TaqDNA聚合酶(北京賽百盛基因技術(shù)有限公司)PCR反應(yīng)條件：變性94℃2.5min：循環(huán)：94

6、℃45 sec，56℃1min， 72℃1.5min，共35個循環(huán)：延伸72℃5min。取純化后PCR產(chǎn)物20ul，限制性內(nèi)切酶MaeⅢ(Roche Diagnostics，Germany)酶切，54℃水浴4h，酶切片段經(jīng)2％瓊脂糖凝膠電泳，溴化乙錠染色后通過UV凝膠成像系統(tǒng)判定結(jié)果。 統(tǒng)計學(xué)處理：對獲得數(shù)據(jù)進(jìn)行整理，核實(shí)，應(yīng)用SPSS10.0軟件分析?；蛐秃偷任换蝾l率采用直接計數(shù)法統(tǒng)計，驗(yàn)證研究對象符合Hardy-wei

7、nberg平衡的程度。對于CRP濃度(mg/L)，因其為非正態(tài)分布，須先進(jìn)行對數(shù)轉(zhuǎn)換，變?yōu)榻普龖B(tài)分布，表示方法為X<,In CRP>±S±S<,In CRP>。根據(jù)資料性質(zhì)和數(shù)據(jù)特點(diǎn)，采用t檢驗(yàn)或X<'2>檢驗(yàn)。以P<0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果： 1．炎癥組人群CRP比較： 入院時感染性炎癥組CRP升高比率為88.18％，CRP值為13.15mg/L(幾何均值)(正常參考值0-2.6mg/L)；入院時免疫

8、性炎癥組CRP升高比率為91.82％。CRP值為26.93 mg/L(幾何均值)。兩組比較(1nCRP)有顯著差異(P<0.01)。兩組炎癥患者CRP異常升高持續(xù)時間：感染性炎癥者CRP升高持續(xù)時間為9.92天(均值，下同)，其中入院1周CRP為4.93mg/L(幾何均值)(正常參考值0-2.6mg/L)；入院2周為1.20mg/L；免疫性炎癥者為19.92天，其中入院1周CRP為18.16mg/L；入院2周為9.75 mg/L；兩組比

9、較(1nCRP)有顯著差異(P<0.01)。 2．兩組炎癥患者CRF，異常升高達(dá)峰值時間的構(gòu)成比較： 感染性炎癥者6小時內(nèi)21例(19.1％)48小時內(nèi)100例(90.9％)。免疫性炎癥者6小時內(nèi)11例(10.0％)48小時內(nèi)83例(75.5％)。兩組比較有顯著差異(P<0.01)。 3．CRP基因型比較： 三組人群CRP各基因型分布：根據(jù)限制性內(nèi)切酶Mae Ⅲ酶切結(jié)果GG型(310bp；233bp；2

10、01bp)者占77.50％-80.00％；GC型(434bp；310bp；233bp；201bp)+CC型(434bp；310bp)者占20.00％-22.5％；兩組炎癥患者CRP基因型及等位基因分布比較無顯著差別，與對照組比較亦無顯著差別(P>0.05)。 4．三種基因型人群CRP水平比較： GG型CRP均值23.21 mg/L，GC型14.07 mg/L，CC型10.24 mg/L，GG與GC，GG與CC型間比較

11、(1nCRP)有顯著差別(P<0.01或P<0.05)；而GC與CC型比較(lnCRP)未見顯著差別(P>0.05)。 結(jié)論：免疫性炎癥者CRP升高水平及持續(xù)時間均高于感染性炎癥，大多數(shù)(75.5％-90.9％)的炎癥患者CRP于入院后48小時內(nèi)達(dá)到峰值。感染性炎癥組多于2周內(nèi)恢復(fù)至正常水平，而免疫性炎癥者CRP異常增高多持續(xù)2周以上。而二種炎癥患者與正常對照組人群CRP1059 G/C基因型與等位基因分布無差異。不同基因型者間