輔酶Q10對口腔潰瘍影響的動物實驗研究.pdf

1、目的:
　　 通過建立大鼠的口腔潰瘍動物模型，觀察輔酶Q10對大鼠口腔潰瘍的影響，驗證其對口腔潰瘍的防治作用，并對輔酶Q10的作用機制進行初步探討，為臨床口服藥物防治口腔潰瘍提供理論基礎。
　　 方法:
　　 運用崔相一[1]、彭玉梅[2]等人的模型制備方法選取6周齡200g左右SD大鼠23只，利用spss軟件隨機分為3組:正常對照組(normalcontrolgroup，NCG)5只;輔酶Q10應用組(coen

2、zymeQ10group，CoQ10G)8只;口腔潰瘍對照組(oralulcermodelgroup，OUMG)8只，另有2只用于口腔潰瘍模型鑒定（提供正常組織和潰瘍組織標本）。動物分籠飼養(yǎng)，自由攝食攝水。適應性喂養(yǎng)一周后，正常對照組不作處理，其它兩組抓取固定后，用蘸有體積分數(shù)為40％冰醋酸的直徑3mm濾紙貼付于大鼠右側口角偏下唇處，作用60s，生理鹽水沖洗1min。24小時后觀察大鼠右側口角黏膜約3mm直徑潰瘍形成，表面黃白色假膜覆蓋

3、，邊緣充血水腫。輔酶Q10應用組每日給藥288mg/kg，正常對照組及口腔潰瘍對照組每日給等容量雙蒸水，給藥方式皆為灌胃。各實驗組(CoQ10G、OUMG)分別于給藥的第3天，第5天，第8天隨機抽取一只大鼠觀察潰瘍愈合情況并處死迅速切取潰瘍的口腔黏膜組織置于4％多聚甲醛溶液中，行HE染色組織病理學檢查和免疫組化分析，其它大鼠記錄愈合日期，潰瘍剛好全部愈合后，頸椎脫臼法處死三組大鼠并迅速剪取口腔黏膜潰瘍組織及正常對照組相應部位組織，-80

4、℃保存，分光光度法測超氧化物歧化酶SOD(superoxidedismutase，SOD)的活性、硫代巴比妥酸(thibabituricacid，TBA)法測丙二醛MDA(Malondialdehyde)的含量。
　　 結果:
　　 1、創(chuàng)傷性口腔潰瘍動物模型的建立
　　 冰醋酸處理大鼠24h后大鼠相應黏膜處形成3mm直徑的圓形缺損，略為凹陷，邊緣整齊，周邊紅腫充血，表面黃白色假膜覆蓋。
　　 2、組織形

5、態(tài)學觀察（模型鑒定）
　　 正常大鼠口腔黏膜組織:大鼠口腔黏膜上皮完整連續(xù)，基底層、棘層、顆粒層、角化層細胞排列有序，胞核胞漿清晰無異型性表現(xiàn)、無空泡性變，上皮下固有層炎性細胞少，上皮釘突較短且整齊(Fig.1)。
　　 大鼠口腔潰瘍黏膜組織:口腔黏膜上皮層連續(xù)性中斷，潰瘍達棘層，可見棘層以上細胞不規(guī)則，邊緣不清晰，胞核固縮，胞漿空泡性變，大量細胞崩解，細胞間散在淋巴細胞、中性粒細胞浸潤，基底層細胞可見核濃染，核漿比增大

6、，上皮釘突延長，潰瘍表面有紅染的壞死組織覆蓋(Fig.2)。
　　 3、一般狀況
　　 實驗組（CoQ10組、OUM組）與正常對照組相比較，一般狀況無明顯改變。
　　 4、肉眼觀察
　　 給藥第3日，輔酶Q10應用組充血水腫稍有減輕，其它組未見改變;
　　 給藥第5日，輔酶Q10應用組潰瘍面積減小，充血水腫減輕，口腔潰瘍對照組個別大鼠水腫減輕;
　　 給藥第8日，輔酶Q10應用組潰瘍面積縮

7、小，假膜脫落，充血不明顯，口腔潰瘍對照組，水腫減輕，個別大鼠假膜脫落。
　　 給藥第13日，輔酶Q10應用組潰瘍?nèi)坑?，上皮細胞完全覆蓋潰瘍面，周圍顏色和質地均與正常黏膜無差異，口腔潰瘍對照組大部分已恢復正常色澤和質地，僅個別大鼠原潰瘍處點狀充血。
　　 5、鏡下觀察
　　 給藥第3日,輔酶Q10應用組和口腔潰瘍對照組上皮均不完整，棘層以上細胞邊緣不清晰，大量細胞空泡性變，細胞間淋巴細胞浸潤(Fig.3、Fig

8、.6);
　　 給藥第5日，輔酶Q10應用組空泡性變的細胞減少，細胞間炎性細胞減少，基底細胞規(guī)整，口腔潰瘍對照組異常細胞有所減少(Fig.4、Fig.7);
　　 給藥第8日，輔酶Q10應用組上皮層趨于正常，表層變性壞死的細胞減少，細胞排列趨于規(guī)整，上皮下層成纖維細胞排列緊密，口腔潰瘍對照組仍可見不規(guī)整細胞和較多的炎性細胞（Fig.5、Fig.8）。
　　 6、免疫組織化學觀察
　　 正常對照組及潰瘍當日

9、對大鼠口腔黏膜上皮CK19的表達較少，僅在上皮基底層散在表達。(Fig.9、Fig.10)
　　 給藥第3日，口腔潰瘍對照組和輔酶Q10應用組CK19的表達率均較少，直到給藥第5日，兩者上皮顆粒層大量表達CK19;給藥第8日，CK19表達率進一步提高，可見輔酶Q10應用組比口腔潰瘍對照組CK19表達率更高(Fig.11-Fig.16)。
　　 7、口腔黏膜組織勻漿SOD活性程度及MDA含量檢測
　　 正常對照組中

10、SOD含量（131.01±16.09）U/mg均高于輔酶Q10應用組及口腔潰瘍對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，MDA含量(1.31±0.15)nmol/mg均低于輔酶Q10應用組及口腔潰瘍對照組，差異有顯著性(P＜0.05);
　　 并且，輔酶Q10應用組口腔黏膜組織中SOD水平（114.81±3.69）U/mg相比口腔潰瘍對照組（89.65±12.50）U/mg高，MDA含量（1.83±0.13）nmol/mg相比口

11、腔潰瘍對照組（2.26±0.13）nmol/mg低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)（見Table2、Fig.Ⅰ、Fig.Ⅱ）。
　　 8、口腔潰瘍對照組和輔酶Q10應用組大鼠潰瘍愈合時間比較
　　 口腔潰瘍對照組大鼠潰瘍愈合時間12±1.58d，輔酶Q10應用組大鼠潰瘍愈合時間9.4±1.14d，P＜0.05，差異有統(tǒng)計學意義，可以認為輔酶Q10應用組先于口腔潰瘍對照組愈合。
　　 結論:
　　 1、用

12、體積分數(shù)40％的冰醋酸燒灼大鼠口腔黏膜的方法可以造成其損傷性淺層潰瘍，愈合時間大約13天。
　　 2、口腔潰瘍有自愈傾向，從組織病理形態(tài)學和免疫組織化學方面均證實，以水溶性輔酶Q10灌胃的大鼠比口腔潰瘍對照組大鼠愈合快且好。
　　 3、用化學分析的方法測定大鼠口腔黏膜組織中SOD、MDA的含量，發(fā)現(xiàn)正常組織中有一定的抗氧化能力，并且輔酶Q10能夠增強抗氧化系統(tǒng)功能同時抑制脂質過氧化作用，起到促進潰瘍愈合的功效。