陽離子磷酸膽堿聚合物載AT1受體的siRNA對血管內(nèi)皮細(xì)胞AT1受體表達的影響.pdf

1、目的：觀察新型陽離子磷酸膽堿聚合物MPC30-DEA70能否有效地轉(zhuǎn)染針對AT1受體的小干擾RNA(AT1-R siRNA)至人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vein endothelialcells，HUVECs)及轉(zhuǎn)染后對血管內(nèi)皮細(xì)胞AT1受體表達的影響，這可能為MPC30-DEA70作為基因載體在心血管疾病中的運用奠定基礎(chǔ)。
　　方法：1.應(yīng)用瓊脂糖凝膠電泳表征具有不同比值的MPC30-DEA70(N)與s

2、iRNA(P)(N/P=0，1，3，5，10和15∶1)的復(fù)合物。2.將不同比例的MPC30-DEA70/AT1-R siRNA基因復(fù)合物轉(zhuǎn)染至人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)，應(yīng)用倒置熒光顯微鏡(FM)檢測其細(xì)胞內(nèi)的定位及分布，流式細(xì)胞儀(FCM)檢測轉(zhuǎn)染效率及熒光強度。3.最后以較佳配比復(fù)合物(N/P=1，3，5和10∶1)轉(zhuǎn)染血管內(nèi)皮細(xì)胞，用Western blot法和RT-PCR法檢測AT1受體蛋白及mRNA的表達情況。

3、　　結(jié)果：1.不同N/P比值的PC復(fù)合物在電泳中可見不同程度的電泳遲滯現(xiàn)象，隨電性增強而顯著。2.倒置熒光顯微鏡觀察到MPC30-DEA70/siRNA復(fù)合物在細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)運，提示其有效的細(xì)胞內(nèi)定位。流式細(xì)胞術(shù)顯示隨N/P比值的增大，轉(zhuǎn)染效率明顯增大，熒光強度也隨之增強，與對照組相比有顯著差異(P＜0.05)。3.Western blot法和RT-PCR法顯示PC基因復(fù)合物可使AT1受體的蛋白和mRNA表達的下降，且隨著N/P比值的增大，