乙?；炄~金絲桃素對(duì)淀粉樣前體蛋白加工的影響.pdf

1、阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)是最常見的神經(jīng)退行性疾病，主要以記憶、認(rèn)知功能損傷為主。隨著人口老齡化的日趨明顯，AD的患病率也不斷增加。因此，對(duì)該病的基礎(chǔ)和臨床研究具有重要的社會(huì)意義。AD最重要的病理學(xué)特征之一是老年斑的形成。老年斑豐要足由β-淀粉樣蛋白(β-amyloid peptide，Aβ)構(gòu)成，而Aβ是由淀粉樣前體蛋白(amyloid precursor protein，APP)水解產(chǎn)生的。研究發(fā)現(xiàn)

2、，促進(jìn)APP更多地經(jīng)α，γ-分泌酶所介導(dǎo)的途徑進(jìn)行水解加工既可以增多具有神經(jīng)營養(yǎng)作用的可溶性淀粉樣前體蛋白(secreted form of α-secretase-derived APP，sAPPa)分泌又能夠減少具有神經(jīng)毒性的Aβ，這對(duì)AD的治療具有重要的應(yīng)用價(jià)值。 貫葉金絲桃素(hyperforin，HF)是貫葉連翹(St．John's Wort，SJW)提取物中的一種成分，長期以來對(duì)HF的研究重點(diǎn)主要集中在抗抑郁作用及其

3、機(jī)制上。乙?；炄~金絲桃素(acetylated hyperforin，ace-HF)是具有比原型更穩(wěn)定物理化學(xué)性質(zhì)的脂溶性衍生物，其抗抑郁功能已被證實(shí)，但其抗阿爾茨海默病方面的用途尚未見公開報(bào)道。 目的：研究HF衍生物-ace-HF對(duì)APP表達(dá)及加工作用機(jī)制研究。 方法：以轉(zhuǎn)染了pcDNA3.1APP695sw質(zhì)粒的人胚胎腎細(xì)胞HEK293(humanembryonic kidney cell)和人成神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞S

4、H-SY5Y(human neuroblastoma cell)為主要研究對(duì)象，用不同濃度的ace-HF處理細(xì)胞一定時(shí)間后，利用ELISA技術(shù)檢測該藥對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中過量表達(dá)的和內(nèi)源sAPPa分泌的影響；RT-PCR技術(shù)檢測APPmRNA水平的變化；Western blot檢測該藥對(duì)細(xì)胞內(nèi)APP蛋白水平的影響；觀察蛋白激酶C(PKC)抑制劑-Calphostin C(Cal．C)對(duì)sAPPa分泌的影響。 結(jié)果：藥物處理12h后

5、，在mRNA表達(dá)水平和蛋白質(zhì)水平上ace-HF對(duì)細(xì)胞內(nèi)APP蛋白均無明顯影響(P>0.05)；ELISA結(jié)果表明，100μmol/L的ace-HF處理過量表達(dá)APP的HEK293細(xì)胞后可使其外源sAPPa的分泌顯著增加，而對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞的處理結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了ace-HF對(duì)內(nèi)源sAPPa分泌的促進(jìn)作用，分別用10μmol/L和100μmol/L的ace-HF可使sAPPa的分泌顯著增加2倍(P<0.05)和2-3倍(P<0.001)

6、；Cal．C(0.5μmol/L)能夠顯著抑制ace-HF對(duì)sAPPa分泌的促進(jìn)作用(P<0.05)。 結(jié)論：本文首次證實(shí)了ace-HF具有促進(jìn)sAPPα分泌的功能，并通過PKC介導(dǎo)的途徑，調(diào)節(jié)APP加工，促進(jìn)α-分泌酶的活性，進(jìn)而增加胞外sAPPα的分泌，對(duì)抑制或減少Aβ的產(chǎn)生具有重要作用，從而對(duì)阿爾茨海默癥具有潛在的預(yù)防和治療作用。本研究成果已申請(qǐng)專利專利申請(qǐng)?zhí)枺?00710030699.6，公開(公告)號(hào)：CN101139