貫葉金絲桃指杭州圖譜研究.pdf

1、本研究以貫葉金絲桃的干燥地上部分為原料，采用超聲波輔助法和回流法對(duì)甲醇、乙醇和丙酮溶劑體系的提取條件進(jìn)行系統(tǒng)研究，考察了高效液相色譜法(HPLC)的方法學(xué)，對(duì)貫葉金絲桃中蘆丁、金絲桃苷和槲皮素進(jìn)行含量測(cè)定，建立了貫葉金絲桃HPLC指紋圖譜。
　　 1．共收集貫葉金絲桃藥材14批、提取物和制劑各2批，并對(duì)貫葉金絲桃藥材進(jìn)行生藥學(xué)鑒定。
　　 2．貫葉金絲桃藥材成分的提取條件研究
　　 (1)提取方法篩選，以甲醇和乙

2、醇為溶劑，采用超聲波輔助提取法、回流法、索氏提取法及滲漉法提取，通過HPLC分析，根據(jù)檢測(cè)到峰的個(gè)數(shù)及峰高，選取超聲波輔助和回流提取。
　　 (2)提取條件選擇，采用超聲波輔助法和回流法對(duì)甲醇、乙醇和丙酮溶劑體系的提取條件進(jìn)行單因素（溶劑濃度、料液比、提取時(shí)間、提取次數(shù)及超聲功率）實(shí)驗(yàn)，在λ,=589nm下比色和HPLC進(jìn)行檢測(cè)，確定了貫葉金絲桃中有效成分的提取工藝，即：以100％丙酮超聲提取，料液比1:40，超聲3次，每次40

3、min，超聲功率為200W。
　　 3．高效液相色譜條件的考察
　　 高效液相色譜方法學(xué)研究，考察五種流動(dòng)相，并對(duì)流動(dòng)相的梯度洗脫程序進(jìn)行研究，且考察了檢測(cè)波長、流速，最終確定的色譜條件：色譜柱Diamonsil(?)C18(250mm×4.6mm，5μm);流動(dòng)相：乙腈（10％甲醇、0.2％甲酸）-水（20％甲醇、0.2％甲酸）梯度洗脫，0～5min時(shí)乙腈10％，5～15min時(shí)乙腈10％→40％，15～40min時(shí)乙

4、腈40％→90％，40～50min時(shí)乙腈90％→100％，50～65min時(shí)乙腈100％，65～66min時(shí)乙腈100％→10％;檢測(cè)波長為270nm;流速為1.0ml/min;柱溫為室溫；進(jìn)樣體積：20μL。
　　 4．樣品中蘆丁、金絲桃苷和槲皮素含量的同時(shí)測(cè)定
　　 以貫葉金絲桃藥材、提取物、制劑及原藥的花、葉、莖為對(duì)象，用HPLC進(jìn)行含量測(cè)定。進(jìn)行了方法學(xué)考察，精密度、重現(xiàn)性和穩(wěn)定性的RSD均在3％以內(nèi)，符合要求。

5、標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性（蘆丁22.7～227.0μg/mL，金絲桃苷24.0～240.0μg/mL，槲皮素39.7～397.0μg/mL）關(guān)系良好。藥材中，14號(hào)陜西鳳縣藥材中蘆丁和金絲桃苷含量最高，均為：0.251％，甘肅隴西藥材中槲皮素含量最高為0.097％。中間提取物中，楊陵沃森的蘆丁、金絲桃苷和槲皮素含量較高，分別為：0.511％、0.342％、0.974％。制劑中，Perika的蘆丁、金絲桃苷含量較高，分別為：1.138％和0.759

6、％，Nature Made中槲皮素含量較高為1.219％。葉中的蘆丁含量最高，為0.085％，花中的金絲桃苷和槲皮素含量最高，為0.118％和0.163％。
　　 5．貫葉金絲桃HPLC指紋圖譜的建立
　　 貫葉金絲桃藥材HPLC指紋圖譜共確立13個(gè)共有峰，其中14批藥材中10批藥材的相似度大于0.90。貫葉金絲桃提取物HPLC指紋圖譜共確立15個(gè)共有峰，2批提取物的相似度大于0.97。貫葉金絲桃制劑HPLC指紋圖譜共確