酒石酸系列氨肽酶抑制劑的設(shè)計(jì)合成與活性研究.pdf

1、氨肽酶N(APN，又稱CD13)是含鋅離子的一種膜結(jié)合型外肽酶，為依賴鋅離子的金屬蛋白酶系列，在哺乳動物的小腸腎臟、中樞神經(jīng)系統(tǒng)等組織中有廣泛表達(dá)。APN大量表達(dá)于腫瘤細(xì)胞表面，對腫瘤的血管生成、侵害具有重大的作用。該酶降解細(xì)胞外基質(zhì)的主要成分，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞在人體的轉(zhuǎn)移和生長；另還能夠?qū)υS多免疫活性物質(zhì)進(jìn)行降解，削弱NK細(xì)胞和巨噬細(xì)胞識別和殺傷腫瘤細(xì)胞的能力，降低機(jī)體的免疫力。故抑制APN的活性可以控制對腫瘤腫瘤細(xì)胞血管生成，同時增

2、強(qiáng)粒細(xì)胞的趨化性，使機(jī)體的免疫力得以提高。APN已被證明作為人體冠狀病毒TEGV和229E病毒的受體。所有這些發(fā)現(xiàn)使APN的研究成為一個關(guān)注的目標(biāo)，同時，近年來抗腫瘤藥物研發(fā)的熱點(diǎn)趨向于開發(fā)高選擇性、高效的的APN抑制劑。
　　 基于結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)的藥物設(shè)計(jì)原理和對已知的類肽類APN抑制劑結(jié)構(gòu)特征的分析與總結(jié)，化合物與APN的結(jié)合部位可分為三個部分，A部分是同Bestatin的苯環(huán)相互作用的疏水口袋，B部分是鋅結(jié)合組(ZBG型)，C部

3、分是另一側(cè)疏水口袋。通過對計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì)軟件的應(yīng)用設(shè)計(jì)新的藥物，結(jié)合酶的晶體結(jié)構(gòu)，本研究設(shè)計(jì)并合成了酒石酸、蘋果酸和煙酸三個系列共40個結(jié)構(gòu)全新的化合物。其化學(xué)結(jié)構(gòu)由波譜分析(IR、ESI-MS、1HNMR)確認(rèn)，所合成的目標(biāo)化合物經(jīng)查閱文獻(xiàn)證實(shí)，未見文獻(xiàn)報(bào)道，均為新化合物。
　　 對所合成化合物進(jìn)行了體外抑酶實(shí)驗(yàn)，并對其活性作出初步評價。選擇APN來對合成物進(jìn)行篩選，從而確定其酶活性的大小。其結(jié)果表明：本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)合成的化合

4、物中的大多數(shù)都對APN有抑制作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，L-酒石酸系列化合物對APN抑制活性最高，其半數(shù)抑制濃度(IC50)達(dá)到微摩爾級，具有較高抑酶作用。
　　 本實(shí)驗(yàn)選用人紅細(xì)胞白血病K562細(xì)胞對所合成的化合物進(jìn)行抗腫瘤活性篩選，利用MTT法間接測定各目標(biāo)產(chǎn)物作用后腫瘤細(xì)胞增殖的變化，并計(jì)算出腫瘤細(xì)胞的抑制率。并且，從所合成化合物選出四個腫瘤細(xì)胞抑制率較好的化合物(A1、B1、C1、D2)，計(jì)算出它們的半數(shù)抑制濃度(IC50)，篩