GFAP和COX-2在活動期潰瘍性結(jié)腸炎與腸易激綜合征患者活檢大腸粘膜的表達(dá)及臨床意義.pdf

1、腸神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞(enteric glial cell，EGC)在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和生化特征上都與中樞神經(jīng)系統(tǒng)(central nervous system，CNS)的星形膠質(zhì)細(xì)胞非常相似，成熟的EGC表達(dá)腸膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)、鈣結(jié)合蛋白S-100、谷氨酸合成酶和膠質(zhì)細(xì)胞表面抗原Ran22。EGC是給予腸神經(jīng)元支持和營養(yǎng)成分的細(xì)胞，它主要通過合成和釋放神經(jīng)營養(yǎng)因子而對腸神

2、經(jīng)元起營養(yǎng)支持作用。剔除EGC將導(dǎo)致爆發(fā)性小腸炎，其特征是小腸劇烈的炎癥反應(yīng)、出血性壞死以及黏膜完整性的破壞。由于EGC剔除模型的黏膜損害及黏膜下血管性損害的早期改變與許多克羅恩病(Crohn's disease，CD)的病理學(xué)特征相似，故有人提出EGC的裂解，可能促發(fā)了一些發(fā)病機(jī)制從而導(dǎo)致炎癥性腸病(inflammatory bowel disease，IBD)的產(chǎn)生。在一些CD患者的標(biāo)本中發(fā)現(xiàn)，在腸道炎癥發(fā)作之前，EGC已出現(xiàn)異常情

3、況。因此，EGC可能是炎癥過程中的組成部分，而且在維持腸神經(jīng)系統(tǒng)(enteric nervous system，ENS)和黏膜屏障結(jié)構(gòu)和功能的完整性上起著重要的作用。EGC不僅表達(dá)細(xì)胞因子受體，而且還能產(chǎn)生白細(xì)胞介素1β(interleukin-1，IL-1β)、IL—6和腫瘤壞死因子—α(turnor necrosis factor—α，TNF—α)，這些特征提示EGC可能在腸道炎癥反應(yīng)及免疫應(yīng)答中起積極作用，EGC通過細(xì)胞因子和細(xì)胞

4、受體的表達(dá)充當(dāng)著抗原提呈細(xì)胞的角色并與黏膜免疫相互作用，并參與調(diào)節(jié)胃腸道動力的病理生理學(xué)改變。 環(huán)氧合酶(cycloxygenase—2，COX—2)是花生四烯酸轉(zhuǎn)化為炎癥介質(zhì)和其他生理介質(zhì)(如：前列腺素、前列腺環(huán)素以及血栓素)的限速酶。COX—2是一個誘導(dǎo)型環(huán)氧合酶，它主要是由于IL-1β、TNF—α和許多其他介質(zhì)的刺激下可誘導(dǎo)性表達(dá)。在胃腸道黏膜受到損傷之后，COX—2被認(rèn)為在黏膜的修復(fù)過程中起著重要的作用。在活動性IBD已

5、經(jīng)發(fā)現(xiàn)COX—2誘導(dǎo)性表達(dá)增加。炎癥性腸病伴隨著結(jié)腸的動力改變，它可能促成了疼痛和腹瀉使得疾病進(jìn)一步惡化。這些改變可能是與該疾病增加的前列腺素介導(dǎo)有關(guān)。 在哺乳動物的腦組織中，在正常生理狀態(tài)下，COX—2在部分神經(jīng)元中表達(dá)。腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞不表達(dá)COX—2，僅表達(dá)COX-1，星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)COX—2而不表達(dá)COX-1。有研究表明，大腦局部產(chǎn)生的促炎因子會導(dǎo)致炎癥的聯(lián)級放大，而這些因子又能有效地誘導(dǎo)COX—2表達(dá)，COX—2對炎癥

6、的維持起著重要的作用。在小鼠的星形膠質(zhì)細(xì)胞里，加入IL-1后，COX—2會明顯的增加。且COX—2表達(dá)增加與許多神經(jīng)疾病的病理過程中神經(jīng)元的凋亡有關(guān)。 潰瘍性結(jié)腸炎(Ulcerative Colitis，UC)是一種病因尚未完全明確的腸道非特異性炎癥性疾病，主要累及大腸的黏膜層和黏膜下層。其與CD和未確定型結(jié)腸炎統(tǒng)稱為IBD。目前認(rèn)為主要與腸道的免疫功能紊亂、腸道感染、飲食、遺傳易感及環(huán)境因素等有關(guān)。腸易激綜合征(irritab

7、le bowel syndrome，IBS)是由于遺傳、心理因素等的作用導(dǎo)致胃腸道功能紊亂，出現(xiàn)胃腸道運(yùn)動異常、內(nèi)臟高敏感性和粘膜免疫的變化的功能性胃腸道疾病。了解EGC與IBD、IBS之間的關(guān)系可能有助于闡述IBD和IBS的病理生理學(xué)基礎(chǔ)并對新的藥理學(xué)干預(yù)的研制有重要影響作用。 研究目的： 1.探討GFAP和COX—2在UC、IBS活檢大腸粘膜的表達(dá)水平及其相互關(guān)系。 2.探討GFAP和COX—2與活動期UC的

8、臨床分度和病變范圍的關(guān)系。 3.探討GFAP和COX—2與IBS病程長短、癥狀評分關(guān)系。 4.通過本實(shí)驗(yàn)初步探討EGC與COX—2在IBS與UC的發(fā)病作用。 材料與方法： 1.研究對象 選擇我院2007年8月至2008年12月就診的按羅馬Ⅲ診斷標(biāo)準(zhǔn)診斷為IBS的患者60例，其中IBS—D30例，IBS—C30例。IBS—D組男性12例，女性18例，年齡23～59(40±12)歲；IBS—C組男性1

9、2例，女性18例，年齡19～67(46±15)歲。選擇2004年9月到2008年12月于我院就診的符合我國UC診斷標(biāo)準(zhǔn)和臨床分度標(biāo)準(zhǔn)的活動期中、重度UC患者30例，其中男性13例，女性17例，年齡16～75(42±13)歲。 選擇無消化道癥狀、腸鏡檢查示粘膜正常30例為正常對照組，其中男性17例，女性13例，年齡16～62(39±11)歲。所有組別間的年齡分布、性別構(gòu)成比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。 2.研究方

10、法 (1)詳細(xì)詢問并記錄患者的癥狀及其發(fā)生時間、程度。(2)所有患者均進(jìn)行結(jié)腸鏡檢查，UC患者于炎癥最明顯處、IBS患者于降結(jié)腸處取活檢腸道組織4塊。(3)各組活檢標(biāo)本取得后立即給予10％福爾馬林液固定，石蠟包埋，并進(jìn)行切片。(4)應(yīng)用Envision二步法免疫組織化學(xué)染色方法檢測GFAP與COX—2在各組標(biāo)本中的表達(dá)情況并對其進(jìn)行免疫組化(immunohistochemistry，IHC)評分。 3.統(tǒng)計學(xué)處理

11、 定量資料應(yīng)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示；兩組間均數(shù)比較采用獨(dú)立t檢驗(yàn)；多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析；非正態(tài)分布的定量資料多組間比較采用Kruskal—Wallis檢驗(yàn)或Bonferroni法；計數(shù)資料采用率或構(gòu)成比表示，采用x2檢驗(yàn)或精確概率法(Fisher exact test)；半定量資料兩組間比較采用Mann—whitney秩和檢驗(yàn)；兩組或多組間率的比較采用卡方檢驗(yàn)；等級資料的相關(guān)性分析采用Speraman等級相關(guān)分析；顯著

12、性水準(zhǔn)為α=0.05。所有數(shù)據(jù)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件處理。 結(jié)論： 1.正常腸道組織中存在COX—2和GFAP的表達(dá)，前者幾乎不表達(dá)或弱陽性表達(dá)，后者為強(qiáng)陽性表達(dá)。 2.COX—2在IBS與UC的大腸黏膜中均有不同程度的表達(dá)。COX—2在IBS組中多為弱陽性表達(dá)，且與IBS—D的病程及腹瀉程度有關(guān)，與IBS—C的病程及便秘程度無關(guān)。在活動期UC組中多為強(qiáng)陽性表達(dá)。且與UC的臨床分度有關(guān)，與UC累及的病變部位無

13、關(guān)。 3.GFAP在IBS與UC的大腸黏膜中均有不同程度的表達(dá)。在正常對照組、IBS—D組中多為強(qiáng)陽性表達(dá)，其表達(dá)與IBS—D的病程無關(guān)，其表達(dá)強(qiáng)陽性率與腹瀉程度有關(guān)，在IBS—C組與UC組多為弱陽性表達(dá)。且與IBS—C的便秘程度有關(guān)。其表達(dá)的陽性程度與IBS—C的病程有關(guān)；在活動期UC中，中度組多為強(qiáng)陽性表達(dá)，重度組多為弱陽性表達(dá)，且與UC的臨床分度有關(guān)，與UC累及的病變部位無關(guān)。 4.COX—2與GFAP在IBS、U