Cu2+印跡戊二醛交聯(lián)羧甲基殼低聚糖防治鈾中毒及作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的：研究Cu2+印跡戊二醛交聯(lián)羧甲基殼低聚糖（Cu-Glu-CMC）對(duì)貧鈾（DU）導(dǎo)致的MC3T3-E1細(xì)胞中毒的防護(hù)作用，并初步探討其保護(hù)機(jī)制。
　　方法：采用ICP-MS法檢測(cè)Cu-Glu-CMC對(duì)鈾的螯合飽和容量；EPR、ABTS、FRAP等方法檢測(cè)Cu-Glu-CMC的體外抗氧化活性；DU染毒細(xì)胞前30min分別加入50,100,200mg·L-1Cu-Glu-CMC，MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力，ICP-MS法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)DU蓄

2、積水平；電鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)；流式細(xì)胞儀、DCF熒光染色、MDA和SOD等檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激水平；ELISA法和免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)IL-6分泌及TNF-α表達(dá)；PNPP法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ALP活性；ELISA法檢測(cè)RANKL分泌；茜素紅染色法檢測(cè)細(xì)胞鈣化程度；RT-PCR法檢測(cè)分化相關(guān)基因表達(dá)情況。
　　結(jié)果：Cu-Glu-CMC螯合飽和容量約為58.6μg·mg-1238U，且抗氧化活性與殼聚糖（CTS）相比明顯提高。DU急性染毒

3、后，MC3T3-E1細(xì)胞活性及不同分化狀態(tài)下MC3T3-E1細(xì)胞內(nèi)的DU蓄積量，均具有濃度依賴性和時(shí)間依賴性，細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）含量明顯升高，MDA增加同時(shí)SOD活性減低，IL-6分泌減少，TNF-α生成增加；與DU組相比，Cu-Glu-CMC可明顯降低DU所致細(xì)胞毒性，減少DU的細(xì)胞內(nèi)蓄積；減輕細(xì)胞的ROS水平和MDA含量，提高SOD活性；提高IL-6分泌、降低TNF-α形成。DU慢性染毒后，細(xì)胞內(nèi)有DU蓄積而細(xì)胞活力無明顯改變，

4、ALP活性降低，RANKL分泌增加，鈣化結(jié)節(jié)形成減少，MC3T3-E1細(xì)胞分化過程中相關(guān)基因如runx2、col-1α、bsp、bgp等的表達(dá)減少；與DU組相比，Cu-Glu-CMC可提高ALP活性，降低RANKL分泌，增加鈣化結(jié)節(jié)形成，促進(jìn)分化相關(guān)基因表達(dá)。
　　結(jié)論：Cu-Glu-CMC對(duì)DU所致MC3T3-E1細(xì)胞的毒性作用具有明顯保護(hù)作用，可能與以下機(jī)制有關(guān)：
　?、貱u-Glu-CMC可減少DU的細(xì)胞內(nèi)蓄積所致毒性