乳化異氟醚對(duì)成年大鼠術(shù)后認(rèn)知功能的影響.pdf

1、目的：通過(guò)Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)，觀察成年大鼠單次靜脈注射乳化異氟醚(emulsifiedisoflurane，EI)麻醉前后行為學(xué)的變化；ELISA法測(cè)定大鼠血漿S100的含量及免疫組織化學(xué)法測(cè)定大鼠大腦海馬Aβ、tau蛋白的表達(dá)。探討新型麻醉藥EI對(duì)大鼠學(xué)習(xí)記憶功能的影響，以及術(shù)后認(rèn)知功能障礙的發(fā)生可能機(jī)理，為EI安全應(yīng)用于臨床提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：成年雄性SD大鼠(N=72)，隨機(jī)分為六組：空白對(duì)照組(C組n=12)

2、、陽(yáng)性對(duì)照組(30％脂肪乳組，E組，n=12)、8％乳化異氟醚組(EI組，又分為四個(gè)亞組，即EI麻醉后2h、1d、7d、14d組，每組n=12)。麻醉前所有大鼠進(jìn)行Morris水迷宮定位航行適應(yīng)性訓(xùn)練實(shí)驗(yàn)5d，建立學(xué)習(xí)記憶模型。記錄大鼠從入水到爬上平臺(tái)所需時(shí)間和路程，即逃避潛伏期(s)和總路程(cm)，作為大鼠定位航行實(shí)驗(yàn)的評(píng)價(jià)指標(biāo)。
　　 麻醉前第6d行空間搜索實(shí)驗(yàn)，為觀察大鼠記憶鞏固情況，記錄大鼠120s內(nèi)在平臺(tái)象限停留的時(shí)

3、間(s)；大鼠在平臺(tái)象限游泳路程占游泳總路程百分比(％)；120s內(nèi)大鼠的游泳平均速度(cm/s)和經(jīng)過(guò)平臺(tái)次數(shù)(次數(shù)/120s)，作為大鼠空間搜索能力測(cè)試的評(píng)價(jià)指標(biāo)。適應(yīng)性訓(xùn)練結(jié)束后，C組不進(jìn)行任何藥物干預(yù)，E組給予30％脂肪乳(0.15ml/100g)鼠尾靜脈注射后2h與C組一起再次行水迷宮實(shí)驗(yàn)；EI組給予8％乳化異氟醚(0.15ml/100g)鼠尾靜脈注射后，分別于麻醉蘇醒后2h、1d、7d、14d再次行水迷宮實(shí)驗(yàn)，觀察指標(biāo)同前。

4、各組大鼠水迷宮實(shí)驗(yàn)完成后在各時(shí)間點(diǎn)以1％戊巴比妥鈉(4mg/100g)腹腔注射麻醉后，取眼眶血2-4ml置于肝素管內(nèi)，6℃下3000r/min離心15min后取血漿，用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)檢測(cè)血漿S100含量。開胸，以4％多聚甲醛經(jīng)主動(dòng)脈行腦灌注，斷頭，取腦組織，石蠟包埋，切片，行免疫組化染色測(cè)定海馬Aβ和tau蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果：1、水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：(1)逃避潛伏期：注射EI后2h組為(15.5±5.3)

5、s，C、E組分別為(8.8±6.1，9.3±2.8)s，注射EI后2h組明顯長(zhǎng)于C、E組(P<0.01)，注射EI后1d、7d、14d組分別為(11.3±4.5，8.6±2.5，9.2±2.8)s，與C、E組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；(2)總路程：注射EI后2h組為(386.8±127.2)cm，C、E組分別為(234.8±118.4，291.6±89.3)cm，EI注射后2h組明顯長(zhǎng)于C、E組(P<0.01)，EI后1d、

6、7d、14d組分別為(278.7±96.7，202.0±50.1，237.8±83.0)cm，注射EI后2h組長(zhǎng)于EI后1d、7d、14d組(P<0.05)；(3)平臺(tái)象限停留時(shí)間：注射EI后2h組為(35.0±9.8)s，C組為(45.4±12.7)s，注射EI后2h組明顯短于C組(P<0.01)，EI后1d、7d、14d組分別為(45.1±13.3，45.8±9.7，53.5±10.8)s，EI后2h組短于EI后1d、7d、14d組

7、(P<0.05)；(4)平臺(tái)象限游泳路程占游泳總路程百分比：各組組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；(5)游泳速度：各組組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；(6)經(jīng)過(guò)平臺(tái)次數(shù)：各組組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 2、ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示：注射EI后14d組血漿S100含量為(38.5±10.5)pg/ml，C、E組分別為(133.6±24.2，130.3±89.4)pg/ml，EI后2h、1d、7

8、d組分別為(199.1±72.3，116.2±29.5，121.1±41.2)pg/ml，EI后14d組低于C、E組，EI后2h、1d、7d組(P<0.05)，EI后2h組高于C、E組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 3、免疫組化染色結(jié)果顯示：(1)Aβ結(jié)果：C、E組，EI后2h、1d、7d、14d組大鼠大腦海馬中CA1區(qū)Aβ陽(yáng)性反應(yīng)平均光密度值分別為(0.157±0.060，0.210±0.087，0.182±0.

9、080，0.133±0.056，0.061±0.021，0.053±0.011)，C、E組，EI后2h、1d、7d、14d組大鼠大腦海馬中CA3區(qū)Aβ陽(yáng)性反應(yīng)平均光密度值分別為(0.175±0.026，0.159±0.097，0.187±0.074，0.140_±0.058，0.072±0.018，0.056±0.005)，各組組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；(2)tau蛋白結(jié)果：注射EI后2h組大鼠大腦海馬中CA1區(qū)tau蛋

10、白陽(yáng)性反應(yīng)平均光密度值為(0.055±0.018)，EI后1d、7d、14d組分別為(0.021±0.012，0.020±0.003，0.018±0.004)，EI后2h組tau蛋白CA1區(qū)陽(yáng)性反應(yīng)平均光密度值高于EI后1d、7d、14d組(P<0.05)，C、E組，EI后2h、1d、7d、14d組大鼠大腦海馬中CA3區(qū)tau蛋白陽(yáng)性反應(yīng)平均光密度值分別為(0.037±0.037，0.024±0.012，0.038±0.009，0.02

11、0±0.013，0.018±0.004，0.0174±0.005)，各組組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論：1、單次注射乳化異氟醚后2小時(shí)對(duì)SD大鼠空間記憶能力有一定影響，乳化異氟醚麻醉1天后大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力即可恢復(fù)到麻醉前水平。提示在本實(shí)驗(yàn)研究范圍內(nèi)單次注射乳化異氟醚麻醉7天后不會(huì)對(duì)學(xué)習(xí)記憶功能造成損害。2、單次注射乳化異氟醚后2小時(shí)大鼠血漿S100水平雖有所升高，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；乳化異氟醚后14天大鼠血漿S100水平

12、明顯下降。提示乳化異氟醚單次注射后S100在一定范圍內(nèi)的被動(dòng)變化沒(méi)有明顯影響大鼠學(xué)習(xí)記憶功能。3、單次注射乳化異氟醚后大鼠大腦海馬Aβ各組間比較并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。提示乳化異氟醚單次注射后大鼠大腦海馬Aβ波動(dòng)小，與學(xué)習(xí)記憶功能下降無(wú)關(guān)。4、單次注射乳化異氟醚后2小時(shí)大鼠大腦海馬tau蛋白含量較空白組有所增高，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；注射乳化異氟醚后1天、7天、14天大鼠大腦海馬tau蛋白含量均較乳化異氟醚后2小時(shí)明顯減少與麻醉前在同一水平變化。推測(cè)