鬼針草總黃酮中試工藝及其含量測定方法的建立.pdf

1、鬼針草(Bidens bipinnata L.)系菊科鬼針草屬一年生草本植物,在我國大多數(shù)省區(qū)均有分布。鬼針草藥用歷史悠久,味苦、性平而無毒,具有清熱解毒,散瘀消腫等功效,民間常用于治療痢疾、腹瀉、肝炎、胃痛等。鬼針草富含黃酮類化合物,葉中含量高達5％,主要為查耳酮類、噢哢類、黃酮醇類等。本課題組前期發(fā)現(xiàn)鬼針草總黃酮(total flavonoids of Bidens bipinnata L.,TFB)是保肝的有效成分,并且對TFB的

2、制備工藝進行了初步研究。但參照按照中藥五類新藥的要求,中藥成分的有效部位含量必須達到50%以上,因此考慮對此工藝進行優(yōu)化,并進行中試放大研究,為將其開發(fā)成為治療抗肝纖維化的中藥五類新藥提供實驗依據(jù)。
　　具體研究內(nèi)容包括以下二個部分:
　　1.鬼針草總黃酮制備工藝中試研究
　　采用正交實驗法對鬼針草總黃酮提取工藝進行優(yōu)化,確定乙醇提取的生產(chǎn)工藝為用10BV的70%乙醇回流提取2次,每次2h。再通過HPD100大孔樹脂吸

3、附純化,吸附后先以1.5BV的水洗去雜質(zhì),再用3BV的70%乙醇進行洗脫,最后用20BV的乙醇超聲提取2次。在此條件下進行吸附、洗脫,樹脂可重復(fù)使用5次。在實驗室研究的基礎(chǔ)上進行三批中試放大研究,采用比色法測定總黃酮含量>50%,得率為1%。
　　應(yīng)用HPLC法對鬼針草藥材及其連續(xù)生產(chǎn)工藝提取物中金絲桃苷,異槲皮苷和鬼針聚炔苷含量進行測定。采用HPLC法,Agilent ZORBAX SB-C18色譜柱(4.6mm×250mm,5

4、μm),柱溫30℃,以0.4%醋酸乙腈溶液和水溶液為流動相進行液相梯度洗脫,檢測波長255nm,流速1.0 mL·min-1。三種物質(zhì)在30min內(nèi)均達到基線分離,線性關(guān)系良好(R2>0.9994,n=6),日內(nèi)精密度≤1.4%。藥材及其總黃酮提取物樣品溶液中三種成分的平均回收率為99.08%-103.52%,RSD≤3.8%。該法操作簡單,結(jié)果準確,具有較好的重復(fù)性和穩(wěn)定性。
　　2.TFB質(zhì)量控制初步研究
　　質(zhì)量控制是