β-NGF siRNA對大鼠子宮內(nèi)膜異位癥病灶神經(jīng)纖維的影響.pdf

1、背景：
　　 子宮內(nèi)膜異位癥(Endometriosis，EMs)是一種慢性良性的雌激素依賴性的多因素婦科疾病，同時伴有慢性痛經(jīng)等一系列盆腔疼痛，經(jīng)前期盆腹腔疼痛，背痛，排尿困難，大便疼痛，性交困難等癥狀。子宮內(nèi)膜異位癥相關(guān)性疼痛可由腹膜炎癥，粘連形成和子宮內(nèi)膜異位癥病灶的特異性神經(jīng)纖維支配引起，與深部浸潤疾病的存在相關(guān)。研究者發(fā)現(xiàn)在子宮內(nèi)膜異位癥患者的異位病灶上有神經(jīng)纖維的出現(xiàn)。同時，一些報(bào)告顯示在子宮內(nèi)膜異位癥的異位和在位內(nèi)

2、膜上神經(jīng)生長因子NGF（Nerve Growth Factor, NGF）表達(dá)增加。NGF最初被認(rèn)為是一種刺激外周交感和感覺神經(jīng)元生長和分化的多肽，但在過去的幾十年，這種生長因子被證明在多種非神經(jīng)元類型細(xì)胞中表達(dá)，且表現(xiàn)出與神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)展無關(guān)的其它生物效能。首先，NGF是一種疼痛介質(zhì)，能誘導(dǎo)涉及調(diào)節(jié)中樞性疼痛傳遞的抗P物質(zhì)(Substance P，SP)和降鈣素基因相關(guān)肽(Calcitonin gene-related peptide，C

3、GRP)的神經(jīng)肽的表達(dá)。其次，NGF能增加感覺神經(jīng)元的數(shù)目，而且選擇性的營養(yǎng)參與調(diào)節(jié)疼痛感覺的小纖維感覺神經(jīng)元和交感神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元。缺乏NGF或者其特異性受體即抗NGF高親和性受體(Tyrosine kinase receptor-A，TrkA)基因的轉(zhuǎn)基因動物先天性無小直徑感受傷害的感覺神經(jīng)元和痛覺遲鈍。相比之下，過度表達(dá)NGF的動物則行為性痛覺過敏。
　　 EMs被認(rèn)為是一種伴有細(xì)胞和體液免疫紊亂的慢性炎性疾病?；颊吒骨灰旱母?/p>

4、濃度細(xì)胞因子和前列腺素能增強(qiáng)對神經(jīng)纖維的疼痛刺激。促炎細(xì)胞因子已經(jīng)被證明有助于炎性疼痛的發(fā)展和痛覺過敏，可能與EMs的病理生理學(xué)有關(guān)。相反，子宮內(nèi)膜異位病灶能產(chǎn)生炎性和疼痛介質(zhì)，包括前列腺素F，緩激肽，轉(zhuǎn)化生長因子b1，其可誘導(dǎo)對神經(jīng)纖維的局部疼痛刺激。在炎性組織中，NGF的水平增加。
　　 在此項(xiàng)研究中，我們把特異性β-NGF小干擾RNA(β-nerve growth factorsmall interfering RNA,β

5、-NGF siRNA)運(yùn)用到手術(shù)誘導(dǎo)的EMs大鼠里，旨在進(jìn)一步探討siRNA對EMs神經(jīng)纖維的影響和發(fā)病機(jī)制。
　　 目的：
　　 探討特異性β-NGF siRNA的沉默對EMs異位病灶生長，全身性痛覺過敏和神經(jīng)纖維密度的影響。
　　 方法：：
　　 將體質(zhì)量180～210g成年雌性Wistar大鼠，通過手術(shù)成功被誘導(dǎo)為EMs模型。將模型鼠隨機(jī)分為兩組，各12只，即治療組和對照組。通過蛋白免疫印記分析(W

6、estern blot)四種特異性siRNA被檢測，最有效應(yīng)的siRNA通過基因轉(zhuǎn)移被轉(zhuǎn)移到治療組大鼠。同時，對照組以相同方式轉(zhuǎn)入空質(zhì)粒。在基因轉(zhuǎn)入前和后，兩組存活的每一個異位病灶的長×寬×高被測量?；蜣D(zhuǎn)移后兩周，收集異位灶。在所有大鼠被殺之前進(jìn)行鼠尾實(shí)驗(yàn)檢測。標(biāo)本切片和用多種抗神經(jīng)纖維抗體進(jìn)行免疫組化染色。收集兩組的血清和腹腔沖洗液的上清液進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay, EL

7、ISA)分析。
　　 結(jié)果
　　 1.運(yùn)用Western blot方法從四組特異性siRNAs質(zhì)粒中篩選出最有效應(yīng)的特異性siRNA質(zhì)粒.最具有干擾效應(yīng)的特異性β-NGF siRNA是Group3(F=26.12;P＜0.001)。
　　 2.基因槍轉(zhuǎn)移之前的實(shí)驗(yàn)組和對照組的初始體積無明顯差異(P＞0.05)，而在轉(zhuǎn)移之后兩組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。治療組和實(shí)驗(yàn)組的甩尾潛伏期相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.0