骨橋蛋白在大腸癌肝轉(zhuǎn)移中的表達(dá)和功能研究.pdf

1、浙江大學(xué)博士學(xué)位論文骨橋蛋白在大腸癌肝轉(zhuǎn)移中的表達(dá)和功能研究姓名：丁凌申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：鄭樹2003.1.1浙江大掌博E研究生m業(yè)論文OPN是一種富含絲氮酸殘基的磷酸化糖蛋白，其中含有特異的ArgGlyAsp序列(RGD)，這個(gè)序列是蛋白質(zhì)分子中與細(xì)胞粘附有關(guān)的重要功能域J。OPN不僅與骨組織的礦化密切相關(guān)，而且在許多非礦化組織中，如血管、內(nèi)耳、腎、膽囊、胰腺、甚至在巨噬細(xì)胞和激活T淋巴細(xì)胞等中都發(fā)現(xiàn)了該蛋白的表達(dá)

2、，還發(fā)現(xiàn)它與Ca2、NO等細(xì)胞信使、巨噬細(xì)胞趨化反應(yīng)、平滑肌細(xì)胞增生及感染等多種生理、病理現(xiàn)象密切相關(guān)mj。OPN與骨組織的礦化、泌尿系結(jié)石的形成和動(dòng)脈粥樣硬化等生理、病理現(xiàn)象的相關(guān)性已得到犬馘文獻(xiàn)證實(shí)lI?！?。1”，而OPN與惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)系特別是與腫瘤轉(zhuǎn)移的相關(guān)性正日益引起人們的關(guān)注II。但對OPN在大腸癌肝轉(zhuǎn)移中的相關(guān)機(jī)制研究，國內(nèi)外尚沒有相關(guān)報(bào)道。結(jié)合基因芯片的結(jié)果，為進(jìn)一步驗(yàn)證和探索OPN與人腸癌及其肝轉(zhuǎn)移的關(guān)系，開展了

3、本課題研究，以期發(fā)現(xiàn)和探討OPN與大腸癌肝轉(zhuǎn)移發(fā)生發(fā)展的內(nèi)在聯(lián)系，為l艋床預(yù)防和干預(yù)人腸癌肝轉(zhuǎn)移的發(fā)生發(fā)展提供有力的研究平臺，并提供理論依據(jù)。第一部分0PN基因nRNA表達(dá)差異研究采用RTPCR方法和實(shí)時(shí)熒光定量PCR(realtimePCR)方法分別檢測了人腸癌組織、配對正常粘膜、肝轉(zhuǎn)移組織、胃癌組織、乳癌組織、肝癌組織希T#I周血、不同人腸癌細(xì)胞株中OPN的mRNA表達(dá)差異。檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)：OPNmRNA在大腸癌肝轉(zhuǎn)移組織中表達(dá)雖高，

4、大腸癌原發(fā)組織次之，正常大腸粘膜表達(dá)最低：OPNmRNA的表達(dá)隨人腸癌的Dukes’分期增高而有增高趨勢，和病理分化程度關(guān)系不明顯：OPNmRNA在胃癌及肝癌組織中表達(dá)均較周圍正常組織增高，在配對乳腺癌組織中差異不明顯；OPNmRNA在人腸癌患者外周血中可見不同程度表達(dá)；OPNmRNA在人腸癌細(xì)胞株Colo205中目I性表達(dá)，而往SW480大腸癌細(xì)胞株中表達(dá)陰性。第二部分0PNcDNA序列克隆及反義、正義0PN真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建為制備R

5、NA原位雜交探針以檢測OPNmRNA在不同組織中的定位，井為研究OPN轉(zhuǎn)移相關(guān)機(jī)制的細(xì)胞轉(zhuǎn)染作準(zhǔn)備，運(yùn)_I_fJRTPCR技術(shù)分別克隆了兩種OPNcDNA序列：反義序列(201bp)和ORF(974bp)，并由此構(gòu)建了兩種重組真核表達(dá)質(zhì)粒：pcDNA31()OPN(201bp)反義真核表達(dá)質(zhì)粒和pcDNA31()OPN(ORF)正義真核表達(dá)質(zhì)粒，為r一步研究做好前期工作。酶切和測序結(jié)果均顯示這兩種重組質(zhì)粒構(gòu)建成功。第三部分0PN在大腸癌