絲裂原細胞外信號反應激酶阻斷劑對缺氧誘導人視網(wǎng)膜色素上皮細胞增殖的影響.pdf

1、人視網(wǎng)膜色素上皮(retinalpigmentepithelium，RPE)細胞為位于視網(wǎng)膜感光細胞和脈絡膜血管之間的單層細胞，正常情況下RPE細胞既不增殖也不遷移，而在病理情況下，具有游走、分泌、增殖和轉(zhuǎn)化的潛能，RPE與許多眼科疾病的發(fā)生有關，如增殖性玻璃體視網(wǎng)膜疾病、視網(wǎng)膜新生血管性疾病、年齡相關性黃斑變性等。這些疾病的發(fā)生均可導致病人的視功能下降，影響病人生活質(zhì)量。 目的：探討特異性絲裂原細胞外信號反應激酶Ⅰ(MEKI)

2、阻斷劑(PD98059)對缺氧刺激的人視網(wǎng)膜色素上皮細胞增殖的影響，并初步探討其作用機制。 方法：利用95﹪N2和5﹪C02混合氣體建立培養(yǎng)的人RPE細胞缺氧模型，用三種不同濃度的P42/P44MAPK特異性阻斷劑PD98059處理RPE細胞，在缺氧24小時后用MTT的方法檢測細胞的增殖情況，用RT-PCR的方法檢測周期蛋白D的mRNA的表達，并收集細胞進行流式細胞儀的檢測，判斷細胞的周期情況，用Westernblot檢測ERK

3、與磷酸化ERK的蛋白濃度 結(jié)果：(1)P42/P44MAPK途徑抑制劑對RPE細胞的影響：缺氧組RPE細胞的數(shù)量與正常組相比明顯增加(P≤0.05)；P42/P44MAPK途徑抑制劑可以抑制RPE細胞的增殖，并且具有濃度依賴性。 (2)P42/P44MAPK途徑抑制劑對CyclinD的影響：缺氧組CyclinD較正常組明顯增加(P≤0.05)；P42/P44MAPK途徑抑制劑對CyclinD的mRNA有抑制作用，并具有濃

4、度依賴性。 (3)P42/P44MAPK途徑抑制劑對RPE細胞周期的影響：缺氧組G1期細胞明顯增多，加入P42/P44MAPK途徑抑制劑后G1期細胞明顯增加，且具有濃度依賴性。 (4)P42/P44MAPK途徑抑制劑對ERK蛋白的影響：缺氧對ERK的蛋白表達沒有明顯影響，但是可以增加P-ERK的蛋白表達；P42/P44MAPK途徑抑制劑對ERK蛋白表達沒有明顯影響，對于P-ERK具有抑制作用，并具有濃度依賴性。