金線蓮降血糖活性成分及作用機(jī)制的研究.pdf

1、糖尿病是一種慢性的內(nèi)分泌代謝性疾病，發(fā)病機(jī)制至今尚不十分清楚。隨著人們生活水平的日益提高，糖尿病患病率正急劇增加，它引起的多種慢性并發(fā)癥，對(duì)人體產(chǎn)生巨大危害乃至危及生命，目前已成為人類僅次于腫瘤、心血管疾病之后的第三大疾病，尋找征服糖尿病及其并發(fā)癥的有效藥物已成為當(dāng)今醫(yī)藥界競(jìng)相研究的熱點(diǎn)。 金線蓮(Anoectochilusroxburghii(Wall.)Lindl.)，即花葉開(kāi)唇蘭，別名金蠶、金線蘭、金石松、金線虎頭蕉、金線

2、入骨消等，是蘭科開(kāi)唇蘭屬的一種多年生草本植物。它主要分布于亞洲的日本、中國(guó)、斯里蘭卡、印度和尼泊爾等國(guó)，我國(guó)南方福建、廣西、廣東、海南、貴州、四川、云南、臺(tái)灣等省都有著豐富的藥材資源。金線蓮是我國(guó)傳統(tǒng)的珍貴藥材，有清涼解毒，滋陰降火，消炎止痛之功效，對(duì)無(wú)名腫痛、發(fā)燒、止瀉、蛇傷均有顯著療效，且無(wú)毒副作用，使用安全。民間多用其治療糖尿病，高血脂，腫瘤，乙型肝炎等疾病。隨著研究的深入，金線蓮的優(yōu)良品質(zhì)突顯，日益受到世人青睞，具有廣闊的開(kāi)發(fā)前

3、景。 基于草藥金線蓮在民間分布和應(yīng)用較廣、療效確切這一實(shí)際情況，本研究由國(guó)家自然科學(xué)基金及國(guó)家中醫(yī)藥管理局專項(xiàng)基金的資助，主要在降血糖活性篩選的指導(dǎo)下，對(duì)其降血糖的物質(zhì)基礎(chǔ)進(jìn)行了系統(tǒng)的研究；在活性部位分離到主要成分kinsenoside，對(duì)該成分進(jìn)行降血糖、抗腫瘤和抑菌活性篩選，并初步探索該成分的降血糖作用機(jī)理；在活性明確的基礎(chǔ)上，采用高效液相測(cè)定法對(duì)野生金線蓮藥材中的活性成分kinsenoside進(jìn)行了含量測(cè)定研究。

4、一.揮發(fā)油及低極性成分GC-MS測(cè)定 金線蓮全草氣味芳香，本實(shí)驗(yàn)對(duì)揮發(fā)油和石油醚提取物進(jìn)行了GC-MS測(cè)定，均含有脂肪族、芳香族和萜類化合物，其中脂肪族化合物種類最多，含量最高。石油醚部位含相對(duì)較多的芳香族衍生物。 二.不同極性部位降血糖活性篩選 本實(shí)驗(yàn)對(duì)金線蓮進(jìn)行梯度極性系統(tǒng)的萃取，對(duì)各極性部位進(jìn)行了抗高血糖活性篩選和抗氧化作用的初步研究，結(jié)果顯示正丁醇部位呈現(xiàn)顯著的抗高血糖活性，同時(shí)發(fā)現(xiàn)各給藥組抗氧化能力顯著

5、高于模型組。HE染色和TUNEL技術(shù)檢查胰腺組織病理切片結(jié)果表明，該模型誘導(dǎo)的糖尿病的發(fā)生和發(fā)展與胰島β細(xì)胞的損傷和凋亡程度有一定的相關(guān)性。 三.化學(xué)成分研究 對(duì)各部位進(jìn)行系統(tǒng)的化學(xué)成分研究，從中分離得到了21個(gè)化合物，通過(guò)波譜分析及標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照等方法，鑒定出其中10種成分，分別為：3(R)-β-D-吡喃葡萄糖氧基-丁酸(γ)內(nèi)酯(kinsenosideSJY-1)，十八烷酸(硬脂酸SJY-3)，十六烷酸(軟脂酸SJY-4

6、)，β-谷甾醇(SJY-5)，琥珀酸(SJY-6)，對(duì)羥基苯甲醛(SJY-7)，胡蘿卜苷(SJY-8)，4-β-D-吡喃葡萄糖氧基-丁酸甲酯(SJY-22)，對(duì)羥基桂皮酸(p-coumaricacidSJY-27)，鄰苯二酚(SJY-31)。SJY-1，SJY-22，SJY-31為首次從該種植物中分離得到，其中SJY-22和SJY-31為首次從蘭科植物中分離得到，SJY-22為首次分離得到的天然產(chǎn)物，同時(shí)發(fā)現(xiàn)kinsenoside即SJ

7、Y-1在藥材中含量很高。 四.主要成分活性篩選 鑒于正丁醇部位在降血糖實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)的顯著活性，我們對(duì)從中分離的主要成分kinsenoside進(jìn)行了降血糖的活性研究，并從體內(nèi)清除自由基、抗氧化能力和NO活性因子及體外蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)抑制活性方面，初步探討了相關(guān)的降血糖機(jī)制。結(jié)果顯示受試化合物kinsenoside具有顯著的抗高血糖活性，對(duì)高血糖的逆轉(zhuǎn)具有劑量依賴性，使血清超氧化物岐化酶活力和清除羥自由基能力

8、顯著增強(qiáng)，過(guò)氧化產(chǎn)物丙二醛減少，活性因子NO含量明顯降低，總抗氧化能力和分型NOS測(cè)定結(jié)果組間無(wú)顯著性差異，表明該藥的抗高血糖作用與減輕自由基和NO介導(dǎo)的胰島β細(xì)胞損傷密切相關(guān)。胰腺組織病理切片檢查揭示了受試藥通過(guò)胰島β細(xì)胞形態(tài)和功能的恢復(fù)發(fā)揮降血糖作用?？诜咸烟悄土吭囼?yàn)中kinsenoside使高血糖大鼠和正常大鼠對(duì)外源性葡萄糖的耐受能力明顯改善。 體外PTP1B抑制活性篩選結(jié)果表明SJY-1對(duì)PTP1B有顯著的抑制作用，抑

9、制活性明顯強(qiáng)于SJY-22。kinsenoside作為PTP1B抑制劑，用于治療Ⅱ型糖尿病和肥胖癥，值得進(jìn)一步研究和開(kāi)發(fā)。 選取三種敏感細(xì)胞株：人白血病細(xì)胞株(HL-60)、人肺癌細(xì)胞株(A-549)、人肝癌細(xì)胞株(BEL-7402)，篩選化合物kinsenoside的抗腫瘤活性，結(jié)果評(píng)定為無(wú)效。 體外抗菌活性測(cè)試化合物SJY-1和SJY-22，對(duì)金葡菌ATCC25923，肺炎鏈球菌ATCC49619，大腸桿菌ATCC2

10、5922，金葡菌8195(對(duì)紅霉素耐藥)，肺炎鏈球菌8220(對(duì)紅霉素耐藥)無(wú)顯著抑制活性，只對(duì)流感桿菌8227有較弱的抑制活性。 急性毒性試驗(yàn)中，kinsenoside給藥達(dá)400mg/kg劑量組小鼠仍無(wú)不良反應(yīng)，毒性極低。 五.kinsenoside的含量測(cè)定 在主要的生物活性成分明確的基礎(chǔ)上，采用高效液相色譜法測(cè)定藥材中該單體的含量，并進(jìn)行了方法學(xué)考察。濃度范圍3.245-10.35mg/ml，y=248.