雌性性早熟大鼠腦內(nèi)Kiss-1-GPR54的表達(dá)及滋陰瀉火中藥合劑對(duì)其表達(dá)的影響.pdf

1、雌性性早熟大鼠腦內(nèi)Kiss-1/GPR54的表達(dá)及滋陰瀉火中藥合劑對(duì)其表達(dá)的影響目的：本文以達(dá)那唑誘導(dǎo)的雌性性早熟大鼠為模型，通過(guò)觀察腦內(nèi)調(diào)控青春期發(fā)育的關(guān)鍵分子——Kiss-1基因衍生肽kisspeptin及其受體GPR54 (G-proteincoupled receptor 54)在青春期發(fā)育進(jìn)程中的表達(dá)規(guī)律，探討kisspeptin/GPR54在性早熟發(fā)病中的作用；觀察滋陰瀉火中藥合劑對(duì)kisspeptin/GPR54表達(dá)的影響

2、以及kisspeptin/GPR54在滋陰瀉火中藥合劑治療性早熟中的作用，進(jìn)一步認(rèn)識(shí)滋陰瀉火中藥合劑的作用機(jī)制。 方法： (1).出生后3天的SD雌性大鼠，隨母鼠共同飼養(yǎng)，隨機(jī)分為正常組(Normal)、載體組(Vehicle)和模型組(Model)。模型組大鼠在出生后5日齡給予皮下注射300μg達(dá)那唑。采用免疫組織化學(xué)、Westernblot、逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)分別觀察青春期啟動(dòng)前(出生后20日齡)、

3、青春期啟動(dòng)(陰門開啟為標(biāo)志)、青春期啟動(dòng)后(建立2個(gè)規(guī)則的性周期)大鼠腦內(nèi)Kiss-1/GPR-54 mRNA及蛋白的表達(dá)規(guī)律。 (2).采用免疫熒光雙標(biāo)技術(shù)觀察GPR54和GnRH的共存情況，并運(yùn)用側(cè)腦室微量注射GPR54抗體中和法，觀察性早熟模型大鼠在青春期啟動(dòng)前給予不同劑量GPR54抗體(1∶50、1∶100、1∶200)后，陰門開啟時(shí)間的變化及免疫組織化學(xué)法檢測(cè)腦內(nèi)kisspeptin及內(nèi)側(cè)隔核 (rostral med

4、ial septum，MS)、Broca斜角帶核(Broca diagonal band nucleus．DBB)和內(nèi)側(cè)視前區(qū) (medial preoptic nucleus，MPOA)促性腺激素釋放激素(gonadotropin releasing hormone，GnRH)的表達(dá)變化，進(jìn)一步探討kisspeptin/GPR54在大鼠性早熟發(fā)病過(guò)程中的作用。 (3).采用免疫組織化學(xué)、逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)方法

5、，觀察喂飼滋陰瀉火中藥合劑后，性早熟模型大鼠腦內(nèi)Kiss-1、GPR54、GnRH mRNA及蛋白的表達(dá)變化，探討滋陰瀉火中藥合劑對(duì)Kiss-1/GPR54表達(dá)的影響及kisspeptin/GPR-54在滋陰瀉火中藥合劑治療性早熟中的作用；并觀察預(yù)先喂飼性早熟模型大鼠(出生后14日齡)滋陰瀉火中藥合劑(3ml/次、1次/日、喂藥7天)后，在青春期啟動(dòng)前(出生后20日齡)運(yùn)用藥理學(xué)方法側(cè)腦室1次性微量注射kisspeptin多肽2nmol

6、、4nmol的方法，觀察大鼠陰門開啟時(shí)間的變化及腦內(nèi)GPR54和GnRH蛋白的表達(dá)變化，進(jìn)一步探討滋陰瀉火中藥合劑治療性早熟的機(jī)制。 結(jié)論： (1).性早熟大鼠青春期啟動(dòng)時(shí)ARC、PeN和POA的kisspeptin/GPR54的表達(dá)異常，下丘腦Kiss-1/GPR54 mRNA 的表達(dá)水平增高，可能參與促進(jìn)大鼠青春期提前啟動(dòng)，導(dǎo)致大鼠性早熟的發(fā)生。 (2).側(cè)腦室注射GPR54抗體可能抑制性早熟大鼠GnRH的表