雌性性早熟大鼠下丘腦GABAA受體α亞基的表達(dá)及滋陰瀉火中藥合劑對(duì)其表達(dá)的影響.pdf

1、目的:觀察GABAA受體α亞基在性早熟模型大鼠下丘腦中的表達(dá)規(guī)律，并初步探討GABAA受體α亞基在性早熟發(fā)病機(jī)制的作用;通過(guò)觀察滋陰瀉火中藥合劑對(duì)性早熟大鼠下丘腦GABAA受體α亞基表達(dá)的影響，探討滋陰瀉火中藥合劑的作用機(jī)制，為該藥治療性早熟提供新的科學(xué)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:實(shí)驗(yàn)共分為兩部分，我們首先觀察了達(dá)那唑誘導(dǎo)的性早熟大鼠下丘腦GABAA受體α1-3亞基mRNA的表達(dá)。將雌性SD大鼠隨機(jī)分為正常組，對(duì)照組和模型組。模型組大鼠

2、在出生后第5天給與皮下注射達(dá)那唑300μg(溶于250μl乙醇乙二醇等體積溶液);對(duì)照組則注射等體積的乙醇乙二醇混合液;正常組不作任何處理。在前一部分的基礎(chǔ)上，我們觀察了滋陰瀉火中藥合劑對(duì)性早熟大鼠下丘腦GABAA受體α亞基表達(dá)的影響:5日齡雌性SD大鼠分為正常組，模型組，生理鹽水組，滋陰瀉火中藥合劑組（以下簡(jiǎn)稱“中藥組”）。后三組在出生后第5天皮下注射達(dá)那唑進(jìn)行造模，正常組不作任何處理;從第15天開(kāi)始中藥組給予滋陰瀉火中藥合劑灌胃，生

3、理鹽水組給予等量生理鹽水灌胃，模型組不作其他處理。滋陰瀉火中藥合劑每毫升含3.3克生藥，每天灌胃量為1.29ml/100g體重，至取材時(shí)為止。
　　各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均于生后22天開(kāi)始觀察陰門開(kāi)啟情況;記錄每只動(dòng)物陰門開(kāi)啟的時(shí)間。取材時(shí)斷頭處死，迅速取下丘腦-80℃保存，取子宮和卵巢稱重，計(jì)算子宮和卵巢系數(shù);取血檢測(cè)雌激素、促性腺激素水平，應(yīng)用RT-PCR和realtimePCR以及Western Blot觀察下丘腦GnRH、GABAA

4、受體α亞基、雌激素α受體以及谷氨酸脫羧酶mRNA的表達(dá)變化。
　　結(jié)果:
　　實(shí)驗(yàn)一
　　1.模型組大鼠陰門開(kāi)啟時(shí)間顯著早于正常組和對(duì)照組(P＜0.01)，在出生后25天模型組大鼠子宮和卵巢的發(fā)育比正常組和對(duì)照組顯著提前(P＜0.05);但在生后32天和44天，三組之間子宮和卵巢的器官系數(shù)無(wú)顯著差異。
　　2.模型組大鼠下丘腦GABAA受體α1和α3亞基mRNA表達(dá)水平顯著下調(diào)，與正常組和對(duì)照組相比，有顯著差異(

5、P＜0.05)，而三組動(dòng)物下丘腦GABAA受體α2亞基mRNA的表達(dá)則無(wú)顯著差異(P＞0.05)。
　　實(shí)驗(yàn)二
　　1.生后第22天，模型組大鼠子宮和卵巢的器官系數(shù)顯著高于正常組(P＜0.05)，而中藥組大鼠子宮和卵巢的器官系數(shù)顯著低于模型組(P＜0.05);模型組和生理鹽水組大鼠子宮和卵巢的器官系數(shù)無(wú)顯著差異(P＞0.05)。
　　2.模型組大鼠血清E2，LH和FSH水平明顯高于正常組和對(duì)照組(P＜0.01)，中藥組

6、三種激素水平比模型組和生理鹽水組有下降，F(xiàn)SH水平有差異(P＜0.05)，E2和LH水平差異尤為明顯(P＜0.01)。
　　3.模型組性早熟大鼠下丘腦GnRH mRNA的表達(dá)顯著上調(diào)，與正常組相比有顯著差異(P＜0.01);中藥組大鼠下丘腦GnRH mRNA表達(dá)水平顯著下降，與模型組相比有顯著差異(P＜0.01)。
　　4.模型組大鼠下丘腦GABAA受體α1和α3 mRNA表達(dá)水平顯著下調(diào)，與正常組相比有顯著差異(P＜0.0

7、1);中藥組大鼠下丘腦GABAA受體α1和α3 mRNA表達(dá)水平顯著升高，與模型組相比，有顯著差異(P＜0.01)。而其他四個(gè)亞基mRNA的表達(dá)在各組之間沒(méi)有差異(P＞0.05)。
　　模型組大鼠下丘腦GABAA受體α1亞基蛋白表達(dá)下降，與正常組相比有顯著差異(P＜0.01);中藥組大鼠下丘腦GABAA受體α1蛋白表達(dá)水平顯著升高，與模型組相比有顯著差異(P＜0.01)。與此相似，模型組大鼠下丘腦GABAA受體α3亞基蛋白表達(dá)下降

8、，與正常組相比有顯著差異(P＜0.01);中藥組大鼠下丘腦GABAA受體α3蛋白表達(dá)水平顯著升高，與模型組相比有顯著差異(P＜0.01)。
　　5.模型組性早熟大鼠下丘腦ERα mRNA水平顯著升高，與正常組相比有顯著差異(P＜0.05);中藥組ERα mRNA表達(dá)水平顯著降低，與模型組相比，有顯著差異(P＜0.05)。
　　6.下丘腦GAD65和GAD67 mRNA的表達(dá)在各組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　

9、結(jié)論:滋陰瀉火中藥合劑可以顯著緩解雌性性早熟大鼠的性早熟癥狀;性早熟大鼠下丘腦GnRH mRNA表達(dá)顯著升高，滋陰瀉火中藥合劑可以顯著下調(diào)GnRHmRNA的表達(dá);性早熟大鼠下丘腦ERα受體mRNA表達(dá)顯著升高，滋陰瀉火中藥合劑可以顯著下調(diào)ERα受體mRNA的表達(dá);性早熟大鼠下丘腦GABAA受體α1和α3 mRNA和蛋白表達(dá)水平顯著降低，滋陰瀉火中藥合劑可以上調(diào)GABAA受體α1和α3亞基mRNA和蛋白的表達(dá)，進(jìn)而抑制GnRH的合成釋放，