大蒜綠變色素分離純化及結(jié)構(gòu)鑒定.pdf

1、大蒜(Allium Sativum L.)為百合科蔥屬植物。蒜的鱗莖具有極高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，含有蛋白質(zhì)、糖類、脂肪、維生素和鈣、磷、鐵、硒、鍺等礦物元素。我國(guó)是大蒜的主要生產(chǎn)國(guó)，其產(chǎn)量占世界總產(chǎn)量的四分之三。除鮮食外，大蒜還經(jīng)常加工成蒜泥、蒜汁、脫水蒜片、蒜粉等制品，但在加工過(guò)程中常常出現(xiàn)綠變現(xiàn)象，嚴(yán)重的影響了產(chǎn)品的外觀質(zhì)量，成為妨礙大蒜進(jìn)一步加工的主要問(wèn)題。因此研究大蒜制品綠變的機(jī)理，對(duì)有效控制發(fā)綠現(xiàn)象，達(dá)到規(guī)?；a(chǎn)具有重要意義。本實(shí)驗(yàn)

2、以大蒜鱗莖為原料，通過(guò)浸提法制備大蒜綠色素粗提液，采用固相萃取法，吸附樹脂法和凝膠層析法對(duì)大蒜綠色素進(jìn)行了分離純化的研究；利用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)測(cè)定大蒜綠色素的分子量，并通過(guò)核磁共振，紅外光譜技術(shù)對(duì)色素樣品進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析；同時(shí)研究了大蒜綠色素的光穩(wěn)定性，為大蒜綠變的機(jī)理研究提供了理論依據(jù)。 1.大蒜綠變色素的分離純化試驗(yàn)建立了高效液相色譜法(HPLC)分離檢測(cè)大蒜綠變色素的方法，確定了檢測(cè)大蒜綠變色素的最佳色譜條件如下：Alltech

3、Alltima C18 C18(25mm×4.6mm)色譜柱，流動(dòng)相為乙腈：水=2:8 (含0.1％甲酸)，柱溫30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)440nm，流速1.0mL/min。在該液相色譜條件下，大蒜綠色素中兩種物質(zhì)的保留時(shí)間分別為2.89min和3.95min。 在此基礎(chǔ)上采用各種柱層析方法對(duì)大蒜綠變色素進(jìn)行了分離純化的研究，并利用高效液相色譜對(duì)其效果進(jìn)行檢驗(yàn)。第一步純化通過(guò)固相萃取法和吸附樹脂法進(jìn)行比較，從四種SPE小柱和兩種大孔樹脂中

4、篩選出最佳柱材料為XAD-16型大孔吸附樹脂。實(shí)驗(yàn)表明，大蒜綠色素粗提液通過(guò)XAD-16型大孔樹脂，用含0.2％HCl的甲醇洗脫，洗脫流速在1BV/h，收集到的綠色素流出液純化效果較好。二次純化采用SephadexLH-20凝膠樹脂進(jìn)行分離純化，用純甲醇作為洗脫液，流速在1.2BV/h，即可獲得較高純度的樣品。 2.綠色素物質(zhì)的分子量測(cè)定和結(jié)構(gòu)鑒定試驗(yàn)通過(guò)液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)測(cè)定綠色素物質(zhì)的分子量，結(jié)果顯示綠色素分子量為527。同時(shí)制備

5、綠色素固體樣品，通過(guò)核磁共振，紅外光譜技術(shù)對(duì)其進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。核磁共振初步確定綠色素物質(zhì)：①有吡咯環(huán)，且上有含H的取代基②有不飽和鍵，C=C③有甲基。紅外光譜初步確定綠色素物質(zhì)：①屬于芳香族雜環(huán)化合物，推測(cè)是含N的吡咯衍生物。②有-CH3、-OH、C=C和C=S。 3.大蒜綠色素光穩(wěn)定性的研究采用測(cè)定吸光值以及紫外可見光掃描的方法，研究了各種不同性質(zhì)光線對(duì)色素穩(wěn)定性的影響，試驗(yàn)結(jié)果表明，綠色素對(duì)光的耐受性較差，室外自然光和紫外線對(duì)