宮頸癌預(yù)防性疫苗的研究.pdf

1、宮頸癌在全球婦女癌癥死亡率中位居第二，在一些發(fā)展中國家甚至居于首位，全球每年大約有50萬新發(fā)病例，約20萬人死于宮頸癌，其中80％的死亡病例發(fā)生在發(fā)展中國家。大量研究顯示，生殖道HPV的持續(xù)感染與宮頸癌的發(fā)病密切相關(guān)。現(xiàn)已明確，高危型HPV如HPV16、18是宮頸癌的主要病因，其中又以HPV16最為常見，流行病學(xué)調(diào)查顯示，除上述兩型外，HPV33及HPV58的感染在我國宮頸癌患者中也很常見。因此，在宮頸癌病因?qū)W研究的基礎(chǔ)上研制宮頸癌預(yù)防

2、性疫苗已成為現(xiàn)階段控制宮頸癌的最經(jīng)濟(jì)、有效的方法。 在眾多候選疫苗中，基于重組腺病毒及重組腺病毒伴隨病毒的病毒載體疫苗以及HPV L1病毒樣顆粒(VLPs)疫苗倍受關(guān)注。其中，由Merck公司開發(fā)的HPV16、18、6、11 L1 VLPs四聯(lián)疫苗Gardasil已于2006年完成III期臨床試驗(yàn)并獲得FDA批準(zhǔn)上市。然而，國內(nèi)在該領(lǐng)域的研究相對滯后，因此，本文擬從上述兩個方向進(jìn)行宮頸癌預(yù)防性疫苗的研究。我們首先按照哺乳動物密碼

3、子的偏好在保持氨基酸序列不變的前提下對野生型HPV16L1基因(wt．HPV16L1)進(jìn)行密碼子優(yōu)化，通過全基因合成獲得了優(yōu)化型基因mod．HPV16L1。隨后，我們使用Admax系統(tǒng)及三質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染法成功構(gòu)建了含密碼子優(yōu)化型HPV16L1基因的重組腺病毒rAd-mod．HPV16L1載體及1型重組腺病毒伴隨病毒載體rAAV1-mod．HPV16L1。將rAAV1-mod．HPV16L1載體與重組腺病毒載體rAd-mod．HPV16L1以

4、肌注(i．m．)和滴鼻(i．n．)途徑進(jìn)行單針及與聯(lián)合免疫C57BL/6小鼠，并通過假病毒顆粒體外中和實(shí)驗(yàn)在初免后4個月期間分次檢測各組小鼠血清中抗HPV16中和抗體的水平，結(jié)果顯示，rAAV1-mod．HPV16L1單針及與rAd-mod．HPV16L1聯(lián)合肌注組均可誘導(dǎo)特異性血清中和抗體，與滴鼻組相比，肌注組血清中和抗體出現(xiàn)早，滴度高，在第12、16周仍保持穩(wěn)定；聯(lián)合肌注組抗體滴度在初免后第8周與rAAV1-mod．HPV16L1單

5、針肌注組相近，初免后第16周顯著高于其他免疫組(P<0．05)；聯(lián)合滴鼻組在初免后第16周中和抗體滴度顯著高于各重組病毒單獨(dú)滴鼻組(P<0．05)，顯示了一定的免疫增強(qiáng)作用，但抗體滴度仍顯著低于聯(lián)合肌注組(P<0．05)。從小鼠免疫結(jié)果來看，重組腺病毒載體雖然可通過初免-加強(qiáng)模式誘導(dǎo)高滴度的血清中和抗體，但其單針免疫效果不理想。 病毒樣顆粒疫苗的研究方面，我們首先按照酵母細(xì)胞密碼子的偏好對野生型HPV16、18、33、58 L1