卵巢癌早期診斷的預(yù)警及關(guān)鍵技術(shù)的研究.pdf

1、研究背景：卵巢癌是婦科腫瘤中病死率最高的惡性腫瘤，近10年流行病學(xué)統(tǒng)計顯示其發(fā)病及死亡人數(shù)均呈上升和年輕化趨勢。因早期無明顯臨床癥狀，60-70％患者發(fā)現(xiàn)時已屬晚期，盡管手術(shù)、放療、化療等技術(shù)不斷改進(jìn)，5年生存率僅從37%上升至46%；Ⅰ期卵巢癌患者5年生存率大于90%，大部分患者通過手術(shù)即可治愈，因此卵巢癌早期診斷是提高患者5年生存率的關(guān)鍵，但只有23%的卵巢癌可做到早期診斷，考慮目前仍不能做到早期診斷的原因為：卵巢癌的病理種類繁多，

2、發(fā)展機(jī)制及病因?qū)W尚未明確，缺乏特異度及敏感度均高的腫瘤標(biāo)記物，分子生物學(xué)發(fā)生機(jī)制研究尚未完善等。因此對于卵巢癌的早期診斷仍處于研究階段，目前尚無確切的可應(yīng)用于臨床的理想標(biāo)志物。
　　目的：通過本實驗，利用質(zhì)譜分析方法在卵巢癌患者的血清和腫瘤組織中尋找差異多肽/蛋白，并采用免疫組化的方法，對卵巢漿液性癌組織切片進(jìn)行HE4抗體染色，結(jié)合臨床資料，探索差異多肽/蛋白以及HE4表達(dá)情況與卵巢癌臨床特征的相關(guān)性，以此為基礎(chǔ)建立卵巢癌早期診斷

3、相對特異的預(yù)警體系。
　　方法：1、采用基質(zhì)輔助激光解析飛行時間質(zhì)譜分析（MALDI-TOF-MS）結(jié)合磁珠的技術(shù)對80例卵巢癌、84例卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫和100例健康人群的血清行質(zhì)譜分析得到血清多肽圖，經(jīng)Flexanalysis3.0軟件對多肽圖進(jìn)行歸一化處理標(biāo)峰后，將其中48例卵巢癌、51例卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫和60例健康人群血清作為訓(xùn)練集，利用ClinprotoolsTM2.1軟件建立相應(yīng)的分類診斷模型，將剩余32例卵巢癌

4、、33例卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫和40例健康人群作為測試集驗證模型的敏感度和特異度。2.采用雙向凝膠電泳技術(shù)對3例II期卵巢漿液性癌與3例卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫囊壁組織進(jìn)行檢測，得到雙向電泳圖，篩選每組（包括1例卵巢漿液性癌和1例卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫）差異蛋白質(zhì)斑點；將三組電泳圖進(jìn)行合并后對已篩選出的差異點進(jìn)行復(fù)篩，選出共同差異蛋白質(zhì)斑點；采用質(zhì)譜兼容技術(shù)鑒定復(fù)篩出的蛋白質(zhì)種類。3.采用免疫組化法對74例原發(fā)性漿液性卵巢癌組織切片進(jìn)行HE4抗

5、體檢測，對表達(dá)情況進(jìn)行評分，結(jié)合臨床資料，探討HE4表達(dá)與臨床特征及病理特征的相關(guān)性。
　　結(jié)果:1、卵巢癌與健康女性人群中篩出17個差異多肽峰（P＜0.05），上調(diào)13個,下調(diào)4個，m/z3373，3342，4791，6948可作為診斷截點，以此建立的診斷模型敏感度100%，特異度92.0%；該模型與CA-125相比，前者準(zhǔn)確率100%，后者87.5%。卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫與健康女性人群中篩查出19個差異多肽峰（P＜0.05），

6、上調(diào)15個,下調(diào)6個，診斷截點為m/z3342，6689，診斷模型敏感度81.3%，特異度100.0%。利用各期卵巢癌與卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫血清建立診斷模型的敏感度64.7%，特異度為75%。
　　2.II期卵巢漿液性癌和卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫中篩查出共有的蛋白質(zhì)斑點4個，非共有的蛋白質(zhì)斑點3個，其中下調(diào)蛋白3個，上調(diào)蛋白4個，經(jīng)質(zhì)譜鑒定后，上調(diào)蛋白為：細(xì)胞內(nèi)視黃醇結(jié)合蛋白-2（CRBP-2），Nm-23，伴侶蛋白-10（Chape

7、ronin10），膠轉(zhuǎn)蛋白（Transgelin），下調(diào)蛋白為肌球蛋白調(diào)節(jié)亞基-9（Myl-9），視黃醇結(jié)合蛋白-1（RBP-1），膠轉(zhuǎn)蛋白-2（Transgelin-2）。
　　3.HE4在原發(fā)性卵巢漿液性癌中高表達(dá)，且在無TIC的輸卵管中已有表達(dá)，陽性表達(dá)率在各年齡階段、病理分級及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義，與手術(shù)分期具有一定的相關(guān)性，且陽性率隨期別升高而增高。I、II期中HE4評分低于III期，且隨期別升高（I期-

8、III期），表達(dá)量也逐漸上升。
　　結(jié)論：1.采用MALDI-TOF-MS結(jié)合磁珠技術(shù)以血清為樣本的方法，可建立敏感度、特異度較高的卵巢癌、卵巢子宮內(nèi)膜異位癥的分類診斷模型。卵巢癌模型的診斷準(zhǔn)確性高于單獨應(yīng)用CA-125的準(zhǔn)確性，認(rèn)為MALDI-TOF-MS結(jié)合磁珠技術(shù)可作為早期診斷的技術(shù)平臺。利用此模型可初步鑒別卵巢癌和子宮內(nèi)膜異位癥，說明卵巢子宮內(nèi)膜異位癥的惡性行為與卵巢癌在某些具有一定的相關(guān)性。2.Myl-9、Nm-23與腫