野胡蘿卜揮發(fā)油對Hela細(xì)胞凋亡與壞死的影響.pdf

1、野胡蘿卜（Daucus carota Linn.），傘形科胡蘿卜屬的植物，在世界各地均有分布。野胡蘿卜揮發(fā)油是從野胡蘿卜中提取的易揮發(fā)不溶于水的混合物。研究表明，野胡蘿卜揮發(fā)油具有抗生育、殺蟲、抑菌、抗腫瘤的作用，但有關(guān)體外抑癌方面的研究尚未見報(bào)道。本研究旨在分析野胡蘿卜揮發(fā)油化學(xué)成分，檢測其抑癌抑菌活性，具體研究其對Hela細(xì)胞凋亡及壞死的影響及機(jī)制，為野胡蘿卜的開發(fā)利用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 采用GC/MS分析野胡蘿卜揮發(fā)油的

2、成分，比濁法檢測細(xì)菌活性，MTT法檢測細(xì)胞活力。野胡蘿卜揮發(fā)油處理Hela細(xì)胞后分別采用倒置顯微鏡、電子顯微鏡和AO/EB染色法觀察細(xì)胞形態(tài);單細(xì)胞凝膠電泳、DNA Ladder電泳檢測細(xì)胞DNA的損傷;流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞周期和DNA含量;Western Blot檢測PARP蛋白表達(dá)。
　　 從野胡蘿卜揮發(fā)油中鑒定出31種化合物，以β-紅沒藥烯為主要成分，占到63.06％。野胡蘿卜揮發(fā)油對Hep3B細(xì)胞6h、12h、24 h的I

3、C50分別是55.74、31.82、50.88 mg·L-1，對HuH7細(xì)胞的IC50是122.99、132.25、46.20 mg·L-1，對NCI-H446細(xì)胞的IC50是244.82、113.13、61.76 mg·L-1，對Hela細(xì)胞的IC50是183.88、108.22、99.58 mg·L-1，對A549細(xì)胞的IC50分別是147.19、76.91、57.13 mg·L-1，對PANC-28細(xì)胞的IC50分別是47.86、

4、26.20、34.32 mg·L-1，對HUVEC細(xì)胞的IC50分別是89.23、52.53、52.30 mg·L-1。高濃度(30 g·L-1)的野胡蘿卜揮發(fā)油作用鮑曼不動桿菌24 h的抑制率為33.12％。低野胡蘿卜揮發(fā)油處理24 h后，Hela細(xì)胞表面出現(xiàn)膜泡、細(xì)胞皺縮、核固縮等凋亡特征;在高濃度野胡蘿卜揮發(fā)油作用下，Hela細(xì)胞從細(xì)胞板上脫落，AO/EB染色結(jié)果為橙紅色，細(xì)胞處于壞死的狀態(tài)。野胡蘿卜揮發(fā)油處理6h時(shí)，細(xì)胞核DNA

5、出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象。DNA Ladder電泳結(jié)果中出現(xiàn)了明顯的DNA梯狀條帶，其中100 mg·L-1的野胡蘿卜揮發(fā)油處理組的條帶最亮。通過流式細(xì)胞術(shù)分析，低濃度的野胡蘿卜揮發(fā)油能將Hela細(xì)胞阻滯在G0/G1期，高濃度時(shí)則將其阻滯在G2/M期。Western-blot觀察到野胡蘿卜揮發(fā)油作用24 h后，PARP以116 kDa和89 kDa的形式存在。
　　 野胡蘿卜揮發(fā)油主要成分是β-紅沒藥烯等萜類化合物，具有抑菌抑癌的活性。野胡