PP2對(duì)渥曼青霉素誘導(dǎo)的小鼠空間記憶損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、糖原合酶激酶3（Glycogensynthasekinase-3，簡(jiǎn)稱GSK-3）廣泛存在于真核生物細(xì)胞中，屬于糖原合酶激酶家族，是一種多功能Ser/Thr蛋白激酶。GSK-3包括兩種亞型，GSK-3α和GSK-3β，其中GSK-3β在體內(nèi)廣泛表達(dá)，并且參與機(jī)體內(nèi)多個(gè)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。研究表明，活化的GSK-3β能降低cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(CREB)的表達(dá)并抑制其轉(zhuǎn)錄活性，但其機(jī)制尚不明確。
　　本實(shí)驗(yàn)中，我們以小鼠為研究對(duì)象，系

2、統(tǒng)研究了PP2在GSK-3β活性改變對(duì)CREB的影響及可能機(jī)制中的作用。選擇8周齡的雄性昆明小鼠40只，隨機(jī)分為四組，分別是對(duì)照組、wort組、PP2組、wort+PP2組。每組小鼠經(jīng)過六天的定位航行實(shí)驗(yàn)，第七天手術(shù)側(cè)腦室給藥，24小時(shí)后檢測(cè)藥物對(duì)記憶能力的影響，然后取海馬用免疫印跡的方法檢測(cè)相關(guān)蛋白的表達(dá)。結(jié)果表明:(1)水迷宮結(jié)果顯示:經(jīng)過6天的定位航行實(shí)驗(yàn)，小鼠能在極短的時(shí)間內(nèi)找到隱藏平臺(tái)，具有相對(duì)穩(wěn)定的記憶，且各組小鼠間無顯著差

3、異。注藥24小時(shí)后檢測(cè)小鼠找到隱藏平臺(tái)的潛伏期變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn):與對(duì)照組相比，wort組小鼠找到隱藏平臺(tái)的潛伏期明顯變長;在此基礎(chǔ)上注射PP2后，小鼠找到隱藏平臺(tái)的潛伏期變短?？臻g探索實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:穿過隱藏平臺(tái)所在象限的次數(shù)減少(p＜0.001)以及在隱藏平臺(tái)所在象限的時(shí)間減少(p＜0.01);相比于wort組，穿過隱藏平臺(tái)所在象限的次數(shù)增多(p＜0.01)以及在隱藏平臺(tái)所在象限的時(shí)間也增加(p＜0.01)。(2)免疫印跡結(jié)果顯示:相比于

4、對(duì)照組，wort組GSK-3β的總體水平無明顯影響，但GSK-3β的Ser9位點(diǎn)的磷酸化程度顯著性降低(p＜0.05)，PP2組的磷酸化水平?jīng)]有明顯改變;相比于wort組，wort+PP2組GSK-3β的Ser9位點(diǎn)的磷酸化水平也未發(fā)生明顯改變。(3)wort組Fyn磷酸化水平明顯高于對(duì)照組(p＜0.01)，單獨(dú)給予PP2卻顯著性降低Fyn磷酸化水平(p＜0.01);相比于wort組，wort+PP2組的Fyn磷酸化程度顯著性降低(p＜

5、0.01)。(4)與對(duì)照組相比，wort組NR2B的Tyr1472位點(diǎn)磷酸化水平顯著性增強(qiáng)(p＜0.01)，與wort組相比，wort+PP2組NR2B的Tyr1472位點(diǎn)磷酸化水平顯著性降低(p＜0.001);各組間NR2B總量未發(fā)生明顯改變。(5)相比于對(duì)照組，wort組CaMKⅡ的Thr286位點(diǎn)磷酸化水平有顯著性增強(qiáng)(p＜0.01);與wort組相比，wort+PP2組CaMKⅡ的Thr286位點(diǎn)磷酸化程度降低(p＜0.05);

6、各組間總的CaMKⅡ水平未發(fā)生明顯變化。(6)相比于對(duì)照組，wort組CREB的Ser133位點(diǎn)磷酸化程度降低(p＜0.01);相比于wort組，wort+PP2組CREB的Ser133位點(diǎn)磷酸化水平增加(p＜0.05)，但各組間CREB的總體水平變化不明顯。結(jié)論:wortmannin作為GSK-3β的激活劑，使GSK-3β過量表達(dá)，而GSK-3β可作為Fyn的上游激酶，影響Fyn的表達(dá)，而Fyn又能作用于NMDAR的重要調(diào)節(jié)亞基NR2