磁性-磁性熒光微球的制備及在轉(zhuǎn)基因食品檢測中的應(yīng)用.pdf

1、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）和熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qRT-PCR）是轉(zhuǎn)基因食品檢測的主要手段，其關(guān)鍵是從待檢樣品中快速高通量地提取到高質(zhì)量的核酸，目前主要的核酸提取方法是十六烷基三甲基溴化銨（CTAB）法、十二烷基硫酸鈉（SDS）法和各種試劑盒法，由于CTAB法和SDS法操作繁瑣、需要使用有機(jī)溶劑并且不斷離心，因而不能滿足快速高通量的發(fā)展要求；而試劑盒法由于昂貴的價(jià)格也限制了它在日常檢測中的應(yīng)用；同時(shí)，基于核酸水平的轉(zhuǎn)基因檢測的發(fā)展趨勢

2、是多重檢測，其關(guān)鍵是制備不同種類的熒光微球和對微球的特異探針的修飾。
　　針對以上問題，本論文提出了以磁性分離技術(shù)為基礎(chǔ)的核酸提取方法，該方法的關(guān)鍵是制備磁響應(yīng)性高、單分散性良好和易于表面修飾的磁性微球；將該磁性微球用于大豆樣品核酸提取進(jìn)行綜合評價(jià)；并針對多重檢測制備了不同熒光性能的熒光微球。本文的研究目標(biāo)主要包括三個(gè)方面：（1）通過熱溶劑還原法制備磁響應(yīng)性高、單分散性良好、可重復(fù)性高和易于修飾的磁性微球；（2）將磁性微球用于食品

3、核酸提取中并進(jìn)行綜合評價(jià)，同時(shí)對核酸的特異性提取做了基礎(chǔ)研究；（3）制備了不同熒光性能的熒光/磁性熒光微球。具體工作如下所述：
　　首先采用熱溶劑還原法制備了磁性微球，考察了不同的分散劑、還原劑和前軀體的種類及用量對磁性微球的形貌及分散性的影響，探討了其反應(yīng)機(jī)理。并且通過溶膠-凝膠法法對其表面修飾以制備不同官能團(tuán)的磁性微球。
　　其次，將此磁性微球用于大豆樣品中核酸的提取，并將此方法與傳統(tǒng)核酸提取方法和市售試劑盒對比進(jìn)行綜合

4、評價(jià)；將磁性微球進(jìn)行了鏈霉親和素-生物素-ssDNA的修飾，考察了其對互補(bǔ)以及非互補(bǔ)ssDNA的提取效率。
　　最后，為了進(jìn)一步完善轉(zhuǎn)基因食品檢測體系，針對多重檢測的模式的優(yōu)點(diǎn)：（可以同時(shí)檢測樣品的內(nèi)源基因與多個(gè)外源基因，既減少核酸模板的用量，又提高檢測速度），通過層層自組裝的方法制備了以聚苯乙烯為基質(zhì)的熒光/磁性熒光微球，該熒光/磁性微球的熒光發(fā)射峰可以通過制備的熒光量子點(diǎn)的大小進(jìn)行調(diào)節(jié)，使熒光微球具有不同的熒光性能從而得以區(qū)分