毛竹（Phyllostachys pubescens）與鋪地竹（Pleioblastus argenteastriatus）葉黃酮類(lèi)化學(xué)成分及其生物活性的研究.pdf

1、竹葉黃酮是竹葉提取物主要功能性成分，具有優(yōu)良的生物學(xué)功效，應(yīng)用前景廣闊。以毛竹(iPhyllostachys pubescens)和鋪地竹(Pleioblastus argenteastriatus)為材料，通過(guò)熱回流和自然浸泡法提取，萃取法、硅膠柱、AB-8大孔樹(shù)脂柱、Sephadex LH-20凝膠柱、RP-18反相硅膠柱層析法純化分離，質(zhì)譜、紫外光譜、紅外光譜、核磁共振譜圖進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，對(duì)分離得到的15個(gè)化合物進(jìn)行了結(jié)構(gòu)鑒定；通過(guò)

2、分光光度法和高效液相色譜法(HPLC)測(cè)定黃酮含量，對(duì)六個(gè)純化黃酮工藝、兩種黃酮含量測(cè)定方法進(jìn)行了比較研究；通過(guò)AB-8大孔樹(shù)脂柱層析法對(duì)竹葉提取物初步純化分離，得到黃酮含量不同的組分，對(duì)這些組分的抗氧化活性和抑菌活性進(jìn)行了研究。結(jié)果如下： (1)稱(chēng)取毛竹葉粉1000g，用95％乙醇熱回流提取，提取液濃縮后用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分別萃取分離，各萃取相濃縮得浸膏，把乙酸乙酯和正丁醇萃取相合并后用硅膠柱層析粗分，然后用Sepha

3、dex LH-20凝膠柱、RP-18反相硅膠柱層析法分離得到5個(gè)單體化合物，根據(jù)其質(zhì)譜、紫外光譜、紅外光譜、核磁共振譜圖進(jìn)行了結(jié)構(gòu)鑒定，結(jié)構(gòu)鑒定結(jié)果和分離得到的5個(gè)化合物重量分別如下：化合物1：苜蓿素-7-O-葡萄糖苷，18.5mg；化合物2：木犀草素-6-C-葡萄糖苷(異葒草苷)，118.4mg；化合物3：洋芹素-6-C-葡萄糖苷(異牧荊苷)，86.7mg；化合物4：黃酮類(lèi)化合物，具體結(jié)構(gòu)有待進(jìn)一步鑒定，32.8mg；化合物5：苜蓿素

4、(tricin)，44.3mg。 (2)稱(chēng)取鋪地竹葉粉961g，用95％乙醇自然浸泡提取，提取液濃縮，濃縮液上AB-8大孔樹(shù)脂柱，分別用純水、20％乙醇、40％乙醇、60％乙醇、80％乙醇、丙酮洗脫，各洗脫組分濃縮，分別得到樣品：P20(純水洗脫后，20％乙醇洗脫下組分)，P40(20％乙醇洗脫后，40％乙醇洗脫下組分)，P60(40％乙醇洗脫后，60％乙醇洗脫下組分)，P80(60％乙醇洗脫后，80％乙醇洗脫下組分)，PA(8

5、0％乙醇洗脫后，丙酮洗脫下組分)。然后用Sephadex LH-20凝膠柱、RP-18反相硅膠柱層析法分離得到10個(gè)單體化合物，根據(jù)其質(zhì)譜、紫外光譜、紅外光譜、核磁共振譜圖進(jìn)行了結(jié)構(gòu)鑒定，結(jié)構(gòu)鑒定結(jié)果和分離得到的10個(gè)化合物重量分別如下：化合物6：苜蓿素，107.4mg；化合物7：木犀草素-7-O-葡萄糖苷，5mg；化合物8：有待進(jìn)一步鑒定，1mg；化合物9：木犀草素-6-C-洋地黃毒糖基-7-O-葡萄糖苷，29.6mg；化合物10：為

6、黃酮類(lèi)化合物，具體結(jié)構(gòu)有待進(jìn)一步鑒定，30.8mg；化合物11：苜蓿素-7-O-葡萄糖苷，10mg；化合物12：為黃酮類(lèi)化合物，具體結(jié)構(gòu)有待進(jìn)一步鑒定，332.5mg；化合物13：木犀草素-6-C-蕓香糖苷，449.3mg；化合物14：有待進(jìn)一步鑒定，66.7mg；化合物15：有待進(jìn)一步鑒定，5mg。 (3) 稱(chēng)取毛竹葉粉30g，用70％乙醇超聲輔助提取，提取液過(guò)濾濃縮用水定容至1000mL，每個(gè)工藝吸取100mL作分離純化試

7、驗(yàn)，對(duì)六個(gè)純化工藝進(jìn)行了比較研究，結(jié)果表明：最佳工藝為聚酰胺柱吸附法，工藝流程為：取100mL水溶液→減壓濃縮得濃縮液→拌入聚酰胺并上聚酰胺柱→水洗→以70％乙醇洗脫至檢不出黃酮→洗脫液→減壓濃縮定容至100mL→測(cè)定黃酮含量。對(duì)測(cè)定黃酮含量的分光光度法和HPLC法進(jìn)行了比較研究，結(jié)果表明：分光光度法比HPLC法測(cè)量結(jié)果略微偏高，兩種方法均穩(wěn)定可靠。 (4)稱(chēng)取毛竹葉粉6000g，用95％乙醇熱回流提取，提取液濃縮，濃縮液上AB

8、-8大孔樹(shù)脂柱，分別用純水、20％乙醇、40％乙醇、60％乙醇、80％乙醇、丙酮洗脫，各洗脫組分濃縮，分別得到樣品： M20(純水洗脫后，20％乙醇洗脫下組分)；M40(20％乙醇洗脫后，40％乙醇洗脫下組分)；M60(40％乙醇洗脫后，60％乙醇洗脫下組分)；M80(60％乙醇洗脫后，80％乙醇洗脫下組分)；MA(80％乙醇洗脫后，丙酮洗脫下組分)。樣品P40，P60，P80，PA同(2)。叔丁基對(duì)苯二酚(TBHQ)和2，6-二叔丁基

9、對(duì)甲酚(BHT)為合成抗氧化劑。用清除有機(jī)自由基二苯基三硝基苯肼(DPPH)的方法評(píng)價(jià)樣品抗氧化活性。 通過(guò)研究DPPH溶液吸收光譜，高濃度和低濃度DPPH溶液體系中加入TBHQ、BHT、M40后的吸光值變化，DPPH溶液質(zhì)量濃度與吸光值的關(guān)系等，得出以下結(jié)論：分光光度法測(cè)樣品清除有機(jī)自由基DPPH的方法中，反應(yīng)體系反應(yīng)40 min后測(cè)定結(jié)果穩(wěn)定，測(cè)定波長(zhǎng)為518.4 nm。通過(guò)測(cè)定TBHQ、BHT對(duì)DPPH自由基清除率曲線(xiàn)，提

10、出以IC<,50>值(當(dāng)清除率達(dá)N50％時(shí)，抗氧化劑的濃度值)作為評(píng)價(jià)樣品清除DPPH自由基能力的指標(biāo)，樣品IC<,50>值分別為：TBHQ(21.14mg/L)，BHT(42.09mg/L)，M20(141.11 mg/L>，M40(108.40mg/L)，M60(177.38 me/L)，M80(268.21 mg/L)，MA(837.67 mg/L)，P40(173.26 mg/L)、P60 (319.82 mg/L)，P80(5

11、19.67 mg/L)，PA(364.50mg/L)，清除DPPH自由基能力由強(qiáng)到弱依次為：TBHQ>BHT>M40>M20>M60>P60>P40>PA>P80>MA，其中以M20，M40，M60抗氧化活性較強(qiáng)，IC<,50>值分別達(dá)NBHT的29.86％，38.85％，23.73％． (5)用清除超氧陰離子(O<,2>·<'->)的方法評(píng)價(jià)樣品M20，M40，M60，M80，MA，TBHQ抗氧化活性。通過(guò)對(duì)鄰苯三酚自氧化產(chǎn)物

12、的吸收光譜，鄰苯三酚自氧化速率，鄰苯三酚濃度，緩沖液pH值對(duì)清除率的影響的研究，得出如下結(jié)論：分光光度法測(cè)樣品清除超氧陰離子能力的方法中，測(cè)定波長(zhǎng)為319.5 am，反應(yīng)體系反應(yīng)1 min后測(cè)，測(cè)定9次，每分鐘測(cè)一次，共測(cè)9min，自氧化速率V<,0>=0.035，反應(yīng)體系加入鄰苯三酚0.3mL，緩沖液pH值為8.2。以IC<,50>(清除率為50％時(shí)，抗氧化劑濃度)作為評(píng)價(jià)樣品清除超氧陰離子的指標(biāo)。樣品IC<,50>值分別為：M20(

13、402.56 mg/m)，M40(298.69mg/L)，M60(352.68mg/L)，M80(320.58mg/L)，MA(459.68mg/L)，TBHQ(95.01mg/L)，清除超氧陰離子能力由強(qiáng)到弱依次為：TBHQ>M40>M80>M60>M20>MA，和TBHQ的IC<,50>值相比，樣品M20，M40，M60，M80，MA分別達(dá)到TBHQ清除能力的23.60％、31.81％、26.94％、29.64％、20.67％．

14、 (6)用清除羥自由基(·OH)的方法評(píng)價(jià)樣品M20，M40，M60，M80，MA，TBHQ的抗氧化活性。通過(guò)研究Fe<'2+>與鄰二氮菲生成紅色配合物的吸收光譜，樣品清除羥自由基能力的研究，得出以下結(jié)論：分光光度法測(cè)樣品清除羥自由基的方法中，測(cè)定波長(zhǎng)為509.1nm。在清除率為50％時(shí)，各樣品的濃度遠(yuǎn)高于TBHQ，在清除率為70％時(shí)，以TBHQ的濃度為基準(zhǔn)，樣品M20，M40，M60，M80，MA的清除能力分別相當(dāng)于TBHQ的清除

15、能力的33.54％，40.55％，39.36％，22.36％，3.35％，清除羥自由基能力由強(qiáng)到弱依次為：TBHQ>M40>M60>M20>M80>MA。 (7)通過(guò)在豬油中加入M40，M60，P40，P60，TBHQ，BHT，把豬油放入70℃烘箱中，每隔24h測(cè)定其過(guò)氧化值(POV)，結(jié)果表明：M40，TBHQ，BHT抗氧化作用明顯，M40抗氧化作用基本達(dá)到了TBHQ，BHT的效果，M60、P40、P60也有一定的抗氧化作用。

16、 (8) 通過(guò)測(cè)試M20、M40、M60、M80、MA對(duì)棉花紅腐菌(Fusarium spp)、蘋(píng)果炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides Penz)、番茄枯萎菌(Fusarium oxysporumSchlechtendahl)，P40、P60、P80、PA對(duì)棉花紅腐菌的菌絲生長(zhǎng)抑制率試驗(yàn)，結(jié)果表明：樣品M20、M40、M60、M80、MA均具有良好的抑菌效果；48h時(shí)，對(duì)棉花紅腐菌、蘋(píng)果炭疽菌、

17、番茄枯萎菌的EC50值(菌絲生長(zhǎng)抑制率為50％時(shí)，抑菌劑的濃度)最小的樣品及其EC<,50>分別是：M20(1.10g/L)，MA(0.49g/L)，M80(0.704g/L)；72h時(shí)，對(duì)棉花紅腐菌、蘋(píng)果炭疽菌、番茄枯萎菌的EC<,50>值最小的樣品及其EC<,50>分別是：MA(0.75g/L)，MA(1.28g/L)，M80(2.3g/L)。高濃度(10g/L)樣品P40，P60，P80，PA對(duì)棉花紅腐菌具有良好的抑菌效果，其中P