納米金對(duì)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction，PCR)是生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域最常用、最重要的技術(shù)之一，它能夠?qū)崿F(xiàn)DNA片段的體外擴(kuò)增，可以滿足后續(xù)的分析測(cè)試需要，因此是許多臨床檢測(cè)和生物分析的基礎(chǔ)。納米技術(shù)的發(fā)展以及與生物技術(shù)的融合，為解決生物技術(shù)中的問題提供了機(jī)遇，納米物質(zhì)對(duì)于PCR反應(yīng)的影響也日益受到人們的關(guān)注。本論文研究了納米金對(duì)PCR反應(yīng)的影響，并對(duì)其影響PCR反應(yīng)的機(jī)制進(jìn)行了探討。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明： 1.往P

2、CR體系中加入一定量的納米金(0～1.2 nM)之后，PCR反應(yīng)被抑制，并且這種抑制作用與納米金的濃度有關(guān)，納米金的濃度越大，PCR反應(yīng)產(chǎn)物的產(chǎn)量就越少，當(dāng)納米金濃度大于1.0 nM時(shí)PCR反應(yīng)甚至被完全抑制，得不到擴(kuò)增產(chǎn)物。 2.提高Taq DNA聚合酶的濃度至初始濃度的1.6倍，即可有效地解除納米金對(duì)PCR反應(yīng)的抑制，而分別提高PCR體系其他組分(Mg2+、dNTP、引物、模板等)的濃度至初始濃度的6倍，仍無效。 3

3、.提高Taq DNA聚合酶的濃度可以有效解除納米金對(duì)PCR反應(yīng)的抑制，再次提高納米金的濃度，PCR反應(yīng)又被抑制，如果再次提高Taq DNA聚合酶的濃度又可以解除抑制。說明納米金與Taq DNA聚合酶的相互作用是導(dǎo)致PCR抑制的主要原因。 4.在含有1.0 nM納米金的PCR體系中，保持Taq DNA聚合酶的濃度(1.25 U/μL)不變，添加牛血清蛋白(BSA)，當(dāng)其濃度大于0.04μg/μL時(shí)也可以解除納米金對(duì)PCR反應(yīng)的抑制

4、說明，BSA和Taq DNA聚合酶可以競(jìng)爭(zhēng)性地與納米金相互作用。 5.納米金與Taq DNA聚合酶混合體系的紫外可見吸收光譜結(jié)果顯示：納米金的吸收峰由518 nm紅移到527 nm，并且吸收峰變寬；粒徑分析結(jié)果顯示，粒徑變大；X射線光電子能譜圖上出現(xiàn)了Au和N的吸收峰。這些結(jié)果均證明，納米金與Taq DNA聚合酶和BSA之間存在相互作用。 6.圓二色譜結(jié)果表明，納米金與BSA相互作用后BSA的α-螺旋含量由63.1％降低