再生柞蠶-家蠶絲素共混多孔材料的研究.pdf

1、近年來家蠶絲素由于其獨特的理化性能已經(jīng)被廣泛研究作為組織修復(fù)用生物材料。柞蠶絲素蛋白則含有較多的對哺乳動物細(xì)胞有特異性相互作用的RGD序列，有望在作為細(xì)胞培養(yǎng)基質(zhì)、傷口覆蓋膜、人造皮膚及組織工程支架材料和生物醫(yī)用材料改性等方面有比家蠶絲素更好的效果和應(yīng)用前景。 本文對再生柞蠶/家蠶絲素共混多孔材料的理化性能、柞蠶/家蠶絲素材料的細(xì)胞相容性以及EDC交聯(lián)柞蠶絲素多孔材料對SD大鼠背部真皮缺損的修復(fù)作用進(jìn)行研究。 用1-乙基

2、-3(3-二甲氨基丙基)碳化二亞胺(EDC)、N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)和嗎啉-乙磺酸(MES)對柞蠶/家蠶絲素共混溶液進(jìn)行交聯(lián)，柞蠶/家蠶的共混比例為：100/0、80/20、60/40、40/60、20/80、0/100，并在不同溫度條件下(-80℃、-60℃、-40℃、-20℃)冷凍，最后經(jīng)真空干燥制得多孔材料。用X-射線衍射、紅外光譜等手段研究了共混比例和交聯(lián)劑對多孔材料內(nèi)絲素蛋白結(jié)構(gòu)的影響，結(jié)果表明隨著家蠶絲素所占比例的增加

3、，共混材料中無規(guī)卷曲和α-螺旋結(jié)構(gòu)的含量降低，而柞蠶/家蠶絲素共混多孔材料添加了交聯(lián)劑后α-螺旋結(jié)構(gòu)的含量增加，結(jié)構(gòu)更加規(guī)整。用熱分析的手段研究了不同絲素比例的共混材料的熱穩(wěn)定性，結(jié)果表明柞蠶絲素所占比例越高，共混材料的熱穩(wěn)定性越好，交聯(lián)后的多孔材料的熱穩(wěn)定性優(yōu)于未交聯(lián)的。本文還研究冷凍溫度對柞蠶/家蠶絲素共混多孔材料的壓縮率、吸水率、熱水溶失率和孔徑、孔密度的影響。結(jié)果表明在冷凍溫度相同的情況下，家蠶絲素所占比例較高的共混材料比柞蠶絲

4、素所占比例高的壓縮率小，熱水溶失率小，吸水率小；而柞蠶/家蠶絲素比例一定的情況下，冷凍溫度越高，共混材料的壓縮率越大，吸水率越大，熱水溶失率也越大。柞蠶/家蠶絲素多孔材料的孔徑隨著家蠶絲素所占比例的增加和冷凍溫度的降低而減小，孔密度隨著家蠶絲素所占比例的增加和冷凍溫度的降低而增大。 通過體外細(xì)胞培養(yǎng)，研究了L929細(xì)胞在柞蠶/家蠶絲素材料上的生長情況、活力和形態(tài)，細(xì)胞形態(tài)觀察和MTT比色法的結(jié)果表明細(xì)胞種植天數(shù)相同的情況下，柞蠶

5、絲素膜上細(xì)胞的活力大于家蠶絲素膜和膠原對照組，而柞蠶/家蠶共混絲素膜上的細(xì)胞活力基本介于柞蠶絲素膜和家蠶絲素膜之間。共聚焦顯微鏡觀察結(jié)果表明L929細(xì)胞在EDC交聯(lián)柞蠶絲素多孔材料上增殖情況遠(yuǎn)遠(yuǎn)好于PVA海綿。在細(xì)胞接種密度相同時，相同柞蠶/家蠶絲素比例的共混多孔材料上測得的細(xì)胞MTT值均大于對應(yīng)絲素膜。 在SD大鼠真皮缺損部位植入柞蠶絲素多孔材料、家蠶絲素多孔材料和PVA海綿，在植入后第5，10，15，25天分別取材料植入部位