薯蕷皂素和睪酮在維吉尼鏈霉菌IBL14中的生物轉(zhuǎn)化的初步研究.pdf

1、甾體化合物廣泛存在于動植物體內(nèi)，許多具有各種各樣的生物活性，它們的應用也非常廣泛，有些被采用治療疾病，或發(fā)展生產(chǎn)新的藥劑，例如治療過敏疾病的氫化可的松，避孕藥品黃體酮、利尿劑安體舒通、用于合成甾體激素的薯蕷皂甙元、強心作用的狄戈辛、蟾毒甙等都是甾體化合物。甾體激素具有很強的抗感染、抗過敏、抗病毒和抗休克的藥理作用，是治療風濕、心血管、淋巴白血病、細胞性腦炎、皮膚病、抗腫瘤和搶救危重病人的重要用藥。
　　 在制藥工業(yè)中，甾體類化合

2、物是市場需求最大的產(chǎn)品。薯蕷皂素是生產(chǎn)各種甾體激素類藥物的重要基礎原料。睪酮又稱睪丸素、睪丸酮或睪甾酮，也是一種類固醇荷爾蒙，它是由男性的睪丸或者女性的卵巢分泌，腎上腺也分泌少量睪酮，它具有維持肌肉強度以及質(zhì)量、并且還具有維持骨質(zhì)密度強度、提神及提升體能等作用。睪酮影響許多身體系統(tǒng)和功能，其中包括：血液生成，體內(nèi)鈣的平衡，骨礦化作用，脂代謝，以及糖代謝和前列腺增長。
　　 本文通過篩選的一株新維吉尼鏈霉菌菌株對薯蕷皂素和睪酮進行

3、轉(zhuǎn)化代謝，分離鑒定其代謝衍生物，研究薯蕷皂素和睪酮的代謝機制，包括其中的水解酶，裂解酶，甲氧基化酶，以及羥化酶基因的克隆表達鑒定等工作。
　　 首先一開始先對這株新菌株的培養(yǎng)進行優(yōu)化研究，建立一套合適的培養(yǎng)工藝，接著對新菌株的代謝特點研究，結(jié)果顯示甾體類化合物的投料時機對新菌株的轉(zhuǎn)化和降解具有重大影響。
　　 新菌株對睪酮的代謝中鑒定出了ADD，3，4-HAS，4，9-DHSA等衍生物。對薯蕷皂素的代謝中，鑒定了分子量為

4、412，410,428等衍生物，有利于發(fā)現(xiàn)具有新的生理活性的甾體類藥物。
　　 構建薯蕷皂素和睪酮在新菌株中的代謝路徑，確定其中具有重要意義的酶反應，包括其中的裂解酶和水解酶反應。將其水解酶和裂解酶基因通過序列對比，設計合適的引物克隆出來，并連接到質(zhì)粒pET22b上，轉(zhuǎn)入在大腸桿菌JM109(DE3)中，通過添加IPTG誘導重組菌株表達相應蛋白。
　　 在新菌株的代謝途徑中，還發(fā)現(xiàn)了2個新穎的反應，25位的叔碳羥基化反應