紅芝LYL263混合培養(yǎng)產(chǎn)酶及其作用機(jī)理和應(yīng)用研究.pdf

1、漆酶是一種含銅的多酚氧化還原酶，在染料脫色，造紙廢水降解、生物制漿等方面具有實(shí)用價(jià)值，纖維素酶和半纖維素酶在廢紙脫墨、漂白等制漿工業(yè)中有重要應(yīng)用;微生物混合培養(yǎng)能利用不同菌株作用效果的差異，使產(chǎn)酶量高于單一菌株，目前已經(jīng)取得許多研究成果。
　　本次研究通過(guò)紅芝LYL263分別與白金針菇、蘇平平菇、風(fēng)尾菇混合培養(yǎng)，篩選出了能提高紅芝LYL263產(chǎn)酶的相容菌株-蘇平平菇（下面簡(jiǎn)稱蘇平），兩者混合產(chǎn)漆酶酶活為1346.4U/mL，比紅芝

2、LYL263單獨(dú)培養(yǎng)產(chǎn)酶提高了35.7％，而纖維素酶和半纖維素酶的產(chǎn)酶量在混合培養(yǎng)后并無(wú)提高，通過(guò)進(jìn)一步優(yōu)化，當(dāng)紅芝LYL263與蘇平的菌塊接種比例為4∶2時(shí)，其綜合產(chǎn)酶量最高，最佳接種順序是同時(shí)接入紅芝LYL263和蘇平。
　　通過(guò)對(duì)紅芝LYL263和蘇平混合發(fā)酵的培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化，綜合分析，確定最優(yōu)發(fā)酵培養(yǎng)基成分為:最適碳源是葡萄糖、最適氮源為蛋白胨，當(dāng)葡萄糖濃度為25g/L，蛋白胨濃度為1.5g/L，吐溫-80濃度為1.0μL

3、/L，稻草桿含量為0.1g/L時(shí)，綜合產(chǎn)酶量最高，分別能達(dá)到:漆酶酶活2743.8U/mL、纖維素酶酶活92.3U/mL、半纖維素酶酶活55.1U/mL。
　　通過(guò)對(duì)所產(chǎn)酶液酶學(xué)性質(zhì)研究表明: pH和溫度對(duì)紅芝LYL263混合培養(yǎng)后所產(chǎn)的粗酶液中漆酶、纖維素酶和半纖維素酶性質(zhì)的影響與單獨(dú)培養(yǎng)所產(chǎn)酶并無(wú)差異，漆酶最適作用pH為4.5，最適作用溫度為50℃，在偏酸性、低于30℃的環(huán)境下穩(wěn)定性較好;纖維素酶和半纖維素酶的最適反應(yīng)pH范圍

4、為6.0-7.2，最適反應(yīng)溫度50℃，在中性偏酸、低于50℃環(huán)境下穩(wěn)定性較好。
　　通過(guò)紅芝LYL263與蘇平在平板上共培養(yǎng)發(fā)現(xiàn):兩菌株在生長(zhǎng)一段時(shí)間后產(chǎn)生密集的菌絲交織，并且在交織處呈現(xiàn)黃色;通過(guò)經(jīng)0.45μm濾膜過(guò)濾后的無(wú)菌發(fā)酵液的相互作用，發(fā)現(xiàn)蘇平能促進(jìn)紅芝LYL263產(chǎn)漆酶;通過(guò)非變性聚丙烯酰氨凝膠電泳分析，紅芝LYL263混合培養(yǎng)后所產(chǎn)漆酶同工酶種類(lèi)未發(fā)生變化，但濃度增加。
　　將紅芝LYL263和蘇平混合培養(yǎng)所產(chǎn)

5、粗酶液對(duì)甲基橙、活性艷藍(lán)、孔雀綠、溴酚藍(lán)和結(jié)晶紫五種染料進(jìn)行脫色研究，甲基橙最佳脫色條件是:pH為4，溫度為40℃，酶活為100U/mL，脫色率能達(dá)到73.2％;活性艷藍(lán)最佳脫色條件是:pH為4，溫度為40℃，酶活為100U/mL，脫色率能達(dá)到96.6％;孔雀綠最佳脫色條件是:pH為4，溫度為30℃，酶活為100U/mL，脫色率能達(dá)到96.6％;溴酚藍(lán)最佳脫色條件是:pH為3，溫度為40℃，酶活為100U/mL，脫色率能達(dá)到77.5％;

6、結(jié)晶紫最佳脫色條件是:pH為4，溫度為30℃，酶活為75U/mL，脫色率能達(dá)到88.5％。
　　將紅芝LYL263和蘇平混合培養(yǎng)所產(chǎn)粗酶液與紅芝LYL263單獨(dú)培養(yǎng)所產(chǎn)粗酶液分別處理造紙廢水，當(dāng)處理時(shí)間達(dá)到5h時(shí)，單獨(dú)培養(yǎng)粗酶液處理效果趨于穩(wěn)定狀態(tài)，當(dāng)處理時(shí)間達(dá)到6h時(shí)，混合培養(yǎng)粗酶液處理效果趨于穩(wěn)定狀態(tài)，并且對(duì)造紙廢水的色度和COD的去除率較高;進(jìn)一步優(yōu)化混合粗酶液對(duì)造紙廢水的降解條件:當(dāng)體系中的pH值為5，反應(yīng)溫度為40℃，漆