茶葉中有效生化成分高效液相色譜檢測法的建立及其在鳳凰烏龍茶檢測中的應(yīng)用.pdf

1、茶葉是數(shù)千年來上世界最受歡迎的飲料之一，中國是茶葉生產(chǎn)和消費(fèi)大國。茶葉中含有多種有益人體健康的成分，如多酚類物質(zhì)、氨基酸、生物堿等，正是這些有效生化成分通過多種途徑發(fā)揮著多種有益作用，如抗氧化、抗突變、抗癌和抗過敏等。因此，針對茶葉中的有效生化成分建立快速、高效、準(zhǔn)確的定性定量檢測方法成為研究熱點(diǎn)。
　　 近年來，產(chǎn)于中國廣東省潮安縣鳳凰鎮(zhèn)的鳳凰烏龍茶，因?yàn)槠湎銡忸愃铺烊换ㄏ悴⒕哂刑厥忭嵨叮饑鴥?nèi)眾多學(xué)者的興趣。目前針對鳳凰烏

2、龍茶的研究主要集中于其香氣形成原因、抗氧化作用和生產(chǎn)管理方面，對其主要有效生化成分進(jìn)行系統(tǒng)全面的檢測分析還未見報(bào)道。
　　 因此，本實(shí)驗(yàn)建立了對茶葉中10種兒茶素單體、沒食子酸、可可堿、咖啡堿和茶堿在15min內(nèi)的高效液相色譜（HPLC）檢測法，以及同時(shí)對茶葉中17種游離氨基酸的HPLC檢測法；并將建立的方法應(yīng)用于鳳凰烏龍茶的檢測分析。主要研究結(jié)果如下：
　　 1.通過實(shí)驗(yàn)室已有的兒茶素標(biāo)品和甲基化兒茶素高含量茶--日本

3、Benifuji茶，采用大孔樹脂HP-20對Benifuji綠茶茶樣富集得到粗茶多酚后，運(yùn)用中壓層析系統(tǒng)，80％乙醇洗脫Toyopearl HW-40S柱，對不同組分分別收集再次以同樣的條件分離純化后，得到了純度分別為98.4％和95.3％的甲基化兒茶素EGCG3"Me和ECG3'Me（所得甲基化兒茶素的結(jié)構(gòu)經(jīng)1H NMR、ESI-TOF-MS分析，被證明分別與文獻(xiàn)報(bào)道的EGCG3"Me和ECG3'Me的1H-NMR數(shù)據(jù)一致），以及純度

4、>97％的兒茶素單體EC、EGC、ECG和EGCG。
　　 2.將得到的較高濃度兒茶素單體EC、EGC、EGCG和ECG，加熱異構(gòu)化后由半制備色譜柱Zorbax SB-C18，采用AKTA purifier分離得到純度均>98％兒茶素單體C、GC、GCG和CG。所得單體結(jié)構(gòu)也均經(jīng)過1H-NMR、ESI-TOF-MS分析證明。
　　 3.采用OPA（鄰苯二甲醛）柱前衍生化HPLC檢測，建立了17種游離氨基酸檢測的定性和定量

5、方法；采用SPE（固相萃?。┲幚聿铚搅瞬铚写蟛糠侄喾宇愇镔|(zhì)，從而去除了其對氨基酸檢測時(shí)的影響，并設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)證明了SPE處理法的可行性和有效性。
　　 4.通過已經(jīng)建立的HPLC法對11種鳳凰烏龍荼中10種兒茶素、咖啡堿、可可堿、茶堿和沒食子酸進(jìn)行定量分析。發(fā)現(xiàn)鳳凰烏龍茶中沒食子酸、可可堿和茶堿的含量較低；咖啡堿含量比較高，與鳳凰茶的生長環(huán)境有關(guān)；所有鳳凰烏龍茶中的酯型兒茶素含量都很高，從側(cè)面說明了鳳凰烏龍茶的優(yōu)秀品質(zhì)形成