1-MCP及其與熱結合處理對采后甜椒果實衰老過程中差異蛋白表達的研究.pdf

1、本研究以‘紅方’甜椒果實為試驗材料，運用雙向電泳技術和串聯質譜技術對貯藏期單一1-甲基環(huán)丙烯(1-MCP)和熱與1-MCP結合(HM)處理甜椒果實蛋白表達的差異，通過蛋白功能鑒定與分類并結合蛋白圖譜生物信息學分析，深入探討1-MCP及與熱結合處理對甜椒果實衰老的調控機制。主要研究結果如下:
　　1.建立了適合甜椒果實總蛋白質分離的雙向電泳技術體系。通過酚提取法（提取液pH7.8）提取甜椒果實總蛋白，等電聚焦66000VH條件下，以

2、17cm pH5～8的IPG膠條上樣1200μg進行等電聚焦電泳;SDS-PAGE凝膠濃度為12 g/dL，經過考馬斯亮藍G-250膠體考染后得到效果優(yōu)良的蛋白圖譜。經軟件分析，這種雙向電泳條件檢測出的蛋白點個數約有703±17，分子量在14.4kDa-116.0 kDa之間，并且蛋白點分布均勻，背景清晰且分辨率高，重復性較好，能滿足后續(xù)質譜分析的需要，該優(yōu)化體系的建立為后續(xù)甜椒果實的總蛋白組學研究奠定了技術基礎。
　　2.以甜椒

3、果實‘紅方’為試驗材料，采用上述建立的雙向電泳體系對貯藏期單一1-MCP、熱和1-MCP結合處理甜椒果實進行蛋白質組學差異分析。結果顯示，相同貯藏環(huán)境和貯藏期的兩種處理甜椒果實總蛋白表達情況存在顯著差異。以PDQuest8.0軟件對各處理組的雙向電泳圖譜進行分析，獲得500多個蛋白點，其中2倍以上差異表達的蛋白達67個，經酶解、串聯質譜和數據庫檢索均成功得到鑒定。
　　根據KEGG和PIR功能分類可將差異蛋白分為6類，分別為代謝(

4、64％)、遺傳信息表達和退化(15％)、環(huán)境信息進程(3％)、細胞進程(6％)、脅迫反應與防御(12％)和未知功能蛋白(1％);其中代謝相關的蛋白所占比例最大，其次是脅迫反應與防御相關的蛋白。差異蛋白亞細胞定位顯示，60個蛋白得到了準確的亞細胞定位，主要位于細胞質（22個）、葉綠體（14個）、線粒體（5個）、過氧化物酶體（4個）、細胞壁（4個）、膜（7個）等。
　　比較單一1-MCP及1-MCP與熱結合處理間鉗椒果實蛋白表達差異，

5、發(fā)現多個差異蛋白與果實衰老的調節(jié)相關:參與糖酵解和三羧酸循環(huán)的6-磷酸葡萄糖異構酶、2，3-二磷酸變位酶、檸檬酸合酶出現明顯下調表達，參與谷胱甘肽抗壞血酸循環(huán)的谷胱甘肽還原酶、谷胱甘肽過氧化物酶、錳超氧化物歧化酶、L-抗壞血酸過氧化物酶等出現顯著上調表達，參與細胞生命進程的細胞壁多糖生物合成α-1，4葡聚糖-蛋白質合酶及維持細胞骨架的肌動蛋白-97、α-微管蛋白等也顯著上調表達，正調節(jié)細胞程序性死亡的metacaspase1貯藏后期出現