表面梯度化材料對內(nèi)皮細胞黏附與遷移影響的研究.pdf

1、為探討表面梯度化材料對內(nèi)皮細胞的黏附與遷移行為的影響，通過不同方式體外構建材料表面I型膠原蛋白梯度(蛋白密度梯度和圖案化不同曲率和弧度梯度的蛋白基底)，來研究內(nèi)皮細胞在梯度表面的黏附狀態(tài)和運動趨化性。實驗一通過連續(xù)堿水解聚乳酸膜制備形成羧基密度，并共價偶聯(lián)膠原蛋白形成相應的蛋白密度梯度。接觸角測量儀和激光掃描共聚焦顯微鏡分別表征了-COOH密度梯度和膠原蛋白密度梯度，通過熒光顯微鏡可觀測到明顯的膠原蛋白梯度，以上結果證實了聚乳酸薄膜上通

2、過連續(xù)堿水解方法制備膠原蛋白梯度的可行性。在低密度和中間密度的膠原蛋白梯度區(qū)域培養(yǎng)的內(nèi)皮細胞表現(xiàn)出較強的沿著梯度方向的運動性（凈遷移，趨化指數(shù)，遷移率和細胞軌跡證實），然而，內(nèi)皮細胞在高濃度蛋白密度區(qū)域的運動與膠原蛋白梯度反向。結果表明，細胞運動受膠原蛋白梯度趨向，但必須是適宜的利于細胞黏附的蛋白密度。實驗二基于仿生學原理，根據(jù)人體內(nèi)不同種類和不同口徑（從最細小的毛細血管到大動脈）的血管厚度和彎曲度不同設計出一系列弧度梯度（20 μm,

3、60 μm,100 μm弧度寬度），并運用微接觸印刷技術制備出不同曲率半徑的膠原蛋白基底，掃描電子顯微鏡和光學顯微鏡檢驗PDMS印章表面平整度，激光共聚焦顯微鏡檢驗基底蛋白黏附情況和均勻度，細胞骨架蛋白肌動蛋白和粘著斑蛋白染色觀測細胞粘附狀態(tài)，活細胞工作站對細胞6h運動情況進行錄像，運用相關軟件測定20，60，100 μm弧度寬度梯度之間或自身不同曲率半徑之間的細胞遷移速度和細胞遷移總位移與凈位移比值。結果表明:細胞的黏附狀態(tài)與弧度寬度