豬肺血管緊張素轉化酶的提取分離及其與抑制劑結合過程的熱力學初探.pdf

1、血管緊張素轉化酶(Angiotensin Converting Enzyme，ACE; EC.3.4.15.1)是一種二肽羧基的糖蛋白酶，在血壓調(diào)節(jié)中有重要作用。制備高純度、高活力的ACE是深入研究ACE生化性質(zhì)、結構功能和ACE與抑制劑結合作用的第一步。本論文從豬肺為原料分離純化得到ACE，對純化產(chǎn)物進行酶學性質(zhì)研究，并初步研究了ACE與其抑制劑結合過程的熱力學參數(shù)。主要結果如下:
　　 以新鮮豬肺為原料，用pH8.3含有蔗糖

2、的硼酸緩沖液中進行勻漿離心后，分別利用1.6mol·L-1和2.6mol·L-1兩種不同濃度的硫酸銨分級沉淀，得到的粗酶液進行透析，分別比較了凝膠層析、超濾離心和離子交換-超濾離心三種方法純化透析液的效果。選擇處理量更大，純化倍數(shù)更高的離子交換-超濾離心法作為純化透析液的方法，得到經(jīng)SDS-PAGE顯示為一條帶的ACE純品。經(jīng)SDS-PAGE凝膠電泳分析，所得ACE相對分子質(zhì)量為182KDa，純化倍數(shù)357.3，比活為1.2476U·m

3、g-1，活力回收為12.28％。
　　 對ACE部分酶學性質(zhì)進行了研究發(fā)現(xiàn)，純化的豬肺血管緊張素轉化酶在中性或偏弱堿性條件下表現(xiàn)出較高的活力，其酶活最大值的pH為8.3左右，豬肺ACE對溫度的敏感性較強，最適反應溫度為40℃。研究了ACE催化不同HHL濃度對反應速率的影響，從ACE反應動力學曲線得到Lineweaver-Burk方程計算得到豬肺血管緊張素轉化酶Km為0.849mmol·L-1, Vmax為9.775nmol·mi