一株產(chǎn)幾丁質(zhì)酶細(xì)菌的篩選鑒定、酶學(xué)性質(zhì)及降解幾丁質(zhì)的研究.pdf

1、蝦蟹殼廢棄物是我國漁業(yè)廢棄物的主要成分之一，不僅造成了資源的浪費也會帶來嚴(yán)重的環(huán)境污染。幾丁質(zhì)是蝦蟹殼組分中最具利用價值的成分之一，其降解產(chǎn)物在醫(yī)藥、食品、化妝品、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用。幾丁質(zhì)酶能水解幾丁質(zhì)，因此，拓展幾丁質(zhì)酶基因資源，研究幾丁質(zhì)酶學(xué)性質(zhì)具有一定的理論意義和應(yīng)用價值。
　　本研究采用平板透明圈法和搖瓶法篩選獲得了一株高產(chǎn)幾丁質(zhì)酶的細(xì)菌，通過細(xì)菌形態(tài)觀察、生理生化檢測和分子生物學(xué)實驗對菌株進行了鑒定。在此基礎(chǔ)上，

2、對菌株產(chǎn)酶過程進行了分析。利用硫酸銨沉淀法、膠體幾丁質(zhì)親和吸附法和DEAE-Sepharose FF凝膠吸附法對幾丁質(zhì)粗酶液進行了提純，并研究了其酶學(xué)性質(zhì)。最后，研究了超聲波破碎、微波輻照和超微研磨破碎等預(yù)處理方式對蝦殼粉一步酶法降解的影響。
　　本文的研究結(jié)論如下：
　?。?）本研究篩選獲得了一株高產(chǎn)幾丁質(zhì)酶細(xì)菌，經(jīng)過鑒定，命名為Chitinibacter sp.GC72，目前保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心。對該菌的發(fā)酵進程

3、曲線進行了研究，證實其產(chǎn)酶在72 h左右達到最大值（0.91 U/mL），產(chǎn)幾丁質(zhì)酶過程體系pH值在中性左右，需要誘導(dǎo)劑粉粒幾丁質(zhì)的存在才能合成幾丁質(zhì)酶。
　?。?）通過硫酸銨分級沉淀、膠體幾丁質(zhì)親和吸附和DEAE-Sepharose FF凝膠吸附三步法對菌株所產(chǎn)幾丁質(zhì)酶進行了純化，獲得了電泳級純度幾丁質(zhì)酶。提純回收率為28.1％，純化倍數(shù)7.73，比酶活為21.88 U/mg。電泳結(jié)果證實該酶在活性條件下是雙亞基結(jié)構(gòu)，大小約為1

4、30 KDa。酶學(xué)性質(zhì)研究結(jié)果表明，酶最適的反應(yīng)溫度和pH分別為40℃和6.8。具有良好的熱穩(wěn)定性和pH值穩(wěn)定性。Al3+、Cu2+、Zn2+對酶活有較強的抑制作用，而 Ca2+、Mg2+、Fe2+對酶活則有促進作用。以對硝基苯N-乙酰氨基葡萄糖為底物進行的降解動力學(xué)分析結(jié)果表明，Km值為152.83μmol/L，Vm值為49.12μmol/L·min，反應(yīng)活化能為67.82 KJ/mol。
　?。?）對降解產(chǎn)物進行了薄層板層析、