產(chǎn)蛋白酶海洋細菌的篩選及其酶學(xué)性質(zhì)研究.pdf

1、蛋白酶廣泛應(yīng)用于食品、洗滌劑、醫(yī)藥等行業(yè)。我國近二十年來對蛋白酶的研究取得了重大的進展，但與國外的研究相比，我國的蛋白酶研究目前還存在著微生物資源開發(fā)不足、蛋白酶品種較少、菌株的產(chǎn)酶量不高等問題。而海洋中蘊藏著大量的微生物資源，目前對海洋微生物資源的開發(fā)只占不到總數(shù)的1％。從海洋微生物中，尤其是從深海環(huán)境下分離出來的微生物中篩選蛋白酶，對于彌補我國蛋白酶研究的不足具有重要的意義。
　　 利用牛奶平板篩選法及福林酚法從120多株海

2、洋細菌中篩選蛋白酶高產(chǎn)菌株，其中一株海洋弧菌Vibro fluvialis2761在其原始培養(yǎng)基2216E中即可產(chǎn)生大量的蛋白酶，其發(fā)酵液的蛋白酶活力高達1800U/ml以上。對該菌株產(chǎn)蛋白酶培養(yǎng)基及其發(fā)酵條件的優(yōu)化結(jié)果表明:菌株2761在以玉米粉為碳源、以蛋白胨為氮源、碳氮比為0.2、起始pH值為7.0的培養(yǎng)基中具有最佳的蛋白酶產(chǎn)量;其最佳的發(fā)酵溫度為25℃;最佳接種量為1％。通過優(yōu)化后，菌株2761的發(fā)酵液中蛋白酶活力提高到了270

3、0U/ml以上，比優(yōu)化前提升了50％左右。通過對該菌株發(fā)酵液中的蛋白進行SDS-PAGE電泳檢測及蛋白酶酪素酶譜初步鑒定，該菌產(chǎn)生的蛋白酶表觀分子量大小約為39.3kDa。將蛋白酶粗酶液通過硫酸銨沉淀透析和DEAE陰離子交換層析等步驟進行純化后，對該蛋白酶酶學(xué)性質(zhì)進行了鑒定:其最適作用溫度為55℃，且在40-60℃之間具有良好的酶活性，在低于50℃時，具有良好的熱穩(wěn)定性;最適作用pH值為7.5左右，且在pH5.0-11.0之間具有良好的

4、酸堿穩(wěn)定性;Mn2+對該蛋白酶具有明顯的激活作用，Ca2+和Mg2+對該酶活性基本無影響，而Cu2+和Zn2+對該酶活性具有一定抑制作用;EDTA、SDS和DTT對該酶具有較強烈的抑制作用;而該酶對PMSF、乙醇、尿素和Triton具有一定的耐受性。經(jīng)過純化后的蛋白酶比活力高達13.3萬U/mg，具有良好的工業(yè)應(yīng)用潛能。
　　 從東太平洋深海火山熱液口的沉積物中篩選得到一株產(chǎn)蛋白酶的高溫菌株TVG18-1，其生長溫度為70℃。經(jīng)