高有效組分川貝母的組織培養(yǎng)與質量研究.pdf

1、川貝母(Fritillaria Cirrhosa D.Don)為名貴川產道地藥材，主要分布在海拔2800～4700m的高山灌叢和草地中，大多位于我國西南部橫斷山區(qū)。川貝母用于治療咳嗽、祛痰、平喘效果顯著，其含有的貝母素甲、貝母素乙、西貝母堿等貝母生物堿。然而，在自然條件下川貝母5年才能收獲一次，加之近年來人們大肆采挖，導致野生川貝母資源匱乏，且含有的生物堿含量較低。為解決這一問題，本實驗采用組培生物技術，建立具有高有效組分含量的川貝母快

2、速繁殖體系。此外，為了全面提取川貝母的有效成分，通過正交設計對組培川貝母有效成分的提取工藝進行了研究。同時為了更好地控制組培川貝母的質量，本研究嚴格按照2010版《中國藥典》對組培川貝母進行了質量研究。結果如下:
　　1.以川貝母鱗片葉為外植體，研究了不同激素對川貝母愈傷組織的形成、分化成鱗莖、抽苗以及生根的影響。結果表明，愈傷組織誘導最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA1.0 mg/L+2，4-D0.5mg/L，經45d培養(yǎng)后誘導率為83

3、.33％;分化成鱗莖的最佳培養(yǎng)基為MS+KT2.0mg/L+NAA0.3mg/L，經45 d培養(yǎng)后誘導率為82.77％;抽苗的最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA3.0mg/L+IBA0.3mg/L，經45d培養(yǎng)后抽苗率為85.39％;經60d培養(yǎng)后生根最佳培養(yǎng)基為MS+NAA0.3mg/L，生根率為83.20％。
　　2.研究了秋水仙素濃度、浸泡時間、二甲基亞砜體積分數(shù)、處理溫度對川貝母多倍體誘導的影響。結果表明川貝母多倍體誘導條件的最優(yōu)

4、組合是秋水仙素濃度為900mg/L、浸泡時間為48h、二甲基亞砜體積分數(shù)為4％、處理溫度為20℃，在此條件下培養(yǎng)30d，其誘導率可達94.3％。對野生川貝母、組培二倍體川貝母、經染色體誘導后的多倍體川貝進行了含量測定，結果顯示三者之間總生物堿含量分別為0.237％、0.249％和0.657％，研究表明經組培后的川貝母不論是二倍還是多倍體均比野生川貝母含量高，且多倍體是野生川貝母的2.8倍左右。
　　3.采用正交實驗考察了乙醇濃度、

5、加醇量、提取時間及提取次數(shù)對組培川貝母有效成分提取的影響。結果表明四種因素之間影響效果為乙醇濃度＞加醇倍數(shù)＞提取時間＞提取次數(shù)，當提取工藝為用6倍量85％乙醇，提取2次，每次1.5h時得到的有效成分最多。通過總灰分、酸不溶性灰分、浸出物、生物堿含量、薄層色譜等檢測對組培川貝母進行了質量標準研究，結果表明:組培川貝母的總灰分不應超過2％，酸不溶性灰分不應超過1％，浸出物不得少于20％，總生物堿含量應在0.2％～0.3％之間。
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