江浙蝮蛇中金屬蛋白酶AHPM的活性及結(jié)構(gòu)與金屬離子關(guān)系的研究.pdf

1、蛇毒是由蛋白質(zhì)、多肽、無(wú)機(jī)化合物以及金屬離子組成的一類復(fù)雜的混合物。蛇毒金屬蛋白酶是蛇毒中的主要成分之一，它的催化活性是由金屬離子（鋅離子和鈣離子）調(diào)控的。AHPM是一種來自江浙蝮蛇蛇毒中的具有纖維蛋白水解活性的金屬蛋白酶，含有鋅離子和鈣離子。在本文中，我們主要探究了這兩種離子對(duì)apo-AHPM纖維蛋白溶解活性、熒光活性的影響，并分析了這兩種離子在維持AHPM結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性中所起的作用。
　　在第一章緒論中，我們主要從金屬蛋白酶的研究

2、歷史、分類、功能、X射線結(jié)構(gòu)、與去整合素的結(jié)構(gòu)關(guān)系等方面詳細(xì)介紹了金屬蛋白酶的研究情況。在本章的最后，我們還介紹了蛇毒金屬蛋白酶的應(yīng)用前景，其中的一些蛇毒金屬蛋白酶甚至已經(jīng)發(fā)展到了治療神經(jīng)末梢動(dòng)脈閉塞性疾患和中風(fēng)臨床試驗(yàn)的第三階段。
　　在第二章中，我們對(duì)近十年來蛇毒降壓蛋白和小肽進(jìn)行了綜述。隨著全世界范圍內(nèi)高血壓發(fā)病率的提高，需要迫切尋找各種新型的抗高血壓藥物來解決這一重要的全球健康問題。蛇毒中的降壓肽可以為我們提供新穎的先導(dǎo)化

3、合物來設(shè)計(jì)抗高血壓藥物。到目前為止，蛇類降壓肽的結(jié)構(gòu)、功能和機(jī)理方面研究已取得了巨大的進(jìn)展。在最近十年里，一些新型的降壓肽已從蛇毒中被鑒定出來，這些蛇毒降壓肽被分為五類:血管舒緩激肽強(qiáng)化肽、尿鈉排泄肽、sarafo毒素、磷脂酶A2和L型鈣離子通道阻滯劑。它們中的一些已被用作探究心血管疾病復(fù)雜機(jī)理的便利工具，其他的降壓肽已被用作臨床上的診斷生物指標(biāo)或者用于治療高血壓和心血管疾病的治療藥物。這篇綜述對(duì)目前所理解的蛇毒降壓肽的結(jié)構(gòu)、功能和機(jī)理

4、提供一個(gè)概述。
　　在第三章中，我們研究了鋅離子和鈣離子對(duì)apo-AHPM纖維蛋白溶解活性的激活作用，通過鋅離子和鈣離子對(duì)apo-AHPM的熒光滴定實(shí)驗(yàn)、鹽酸胍變性后的apo-AHPM的熒光滴定實(shí)驗(yàn)、CD譜測(cè)量以及ITC測(cè)量實(shí)驗(yàn)著重探究了鋅離子和鈣離子這兩種內(nèi)源性的金屬離子在apo-AHPM各種活性和結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性中的作用。結(jié)果表明只有鋅離子對(duì)apo-AHPM的纖維蛋白溶解活性和熒光活性起到了明顯的激活作用，鈣離子對(duì)其的激活作用微乎其

5、微，幾乎可以忽略不計(jì)。也只有鋅離子在維持AHPM結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性上具有比較重要的作用，鈣離子在其中的作用很小。在與apo-AHPM的結(jié)合中，鋅離子有兩類結(jié)合位點(diǎn)，而鈣離子可能只有一類結(jié)合位點(diǎn)。值得注意的是，這兩種離子的一個(gè)共同點(diǎn)則是均使apo-AHPM的CD譜的負(fù)峰產(chǎn)生了藍(lán)移，這說明它們都引起了apo-AHPM中構(gòu)象的改變。鋅離子和鈣離子可以互相促進(jìn)與apo-AHPM的結(jié)合，但鋅離子與apo-AHPM的結(jié)合要更為穩(wěn)定一些。在結(jié)合過程中放出的熱