新型生物傳感技術用于端粒酶活性的檢測.pdf

1、端粒酶是一種特殊的DNA聚合酶,具有逆轉(zhuǎn)錄酶活性,能以自身的RNA為模板,以端粒3’末端為引物,合成端粒重復單元TTAGGG。在正常人體細胞中,端粒酶的表達較低。但是在惡性腫瘤細胞,端粒酶的表達較高(它能維持癌細胞端粒的長度,使其無限制擴增)。迄今發(fā)現(xiàn)近90％的腫瘤細胞都有端粒酶活性,端粒酶是目前最廣譜的惡性腫瘤的預警標志物,已成為當今腫瘤診斷的新標志物和腫瘤治療的新靶點。因此,對端粒酶的檢測具有重要意義。
　　 (1)第二章中

2、發(fā)展了一種利用納米金放大技術電化學方法用于端粒酶活性的檢測。該方法通過在金電極表面組裝一條巰基捕獲探針(包含端粒酶的引物序列),在端粒酶的作用下,對捕獲探針進行擴增,納米金標記的DNA探針與擴增序列互補雜交,利用電活性物質(zhì)亞甲基藍可以嵌入DNA雙鏈和吸附納米金表面的特點來實現(xiàn)信號的輸出,進而實現(xiàn)對目標物活性的檢測。該方法快速準確、操作簡單,靈敏度較高。
　　 (2)第三章中研制了一種基于外切酶放大的熒光生物傳感技術用于端粒酶活性

3、的檢測。該方法設計了一條端粒酶的引物探針,一條標記有一個熒光基團和一個猝滅基團的Taqman探針。在端粒酶存在情況下,引物探針進行擴增,擴增序列與‘Taqman探針可以互補雜交,形成雙鏈。然后用T7核酸外切酶(一種只作用于雙鏈DNA,且沿5’→3’方向催化去除5’單核苷酸),沿雙鏈5’→3’方向催化去除5’單核苷酸,使熒光基團和猝滅基團分開,從而熒光得到恢復。由于T7核酸外切酶只水解DNA雙鏈的5’單核苷酸,因此端粒酶的擴增序列可以繼續(xù)

4、結合Taqman探針,可以循環(huán)利用,進而實現(xiàn)對信號的循環(huán)放大,大大降低了檢測下限。該方法具有快速,選擇性好,靈敏度高,操作簡單和背景干擾較低等優(yōu)點。
　　 (3)蝎型探針是一種特殊的分子信標,它除了具有分子信標特有的高度特異性外,還具有本身的特征——防止擴增產(chǎn)物之間的相互競爭。第四章基于蝎型探針的特點,設計了一種基于探針-靶雜交體的蝎型探針用于端粒酶活性的檢測。實驗設計了一條標記有熒光基團和猝滅基團的端粒酶引物的蝎型探針鏈,在退