對小地老虎有殺蟲活性的Bt菌株特性的研究.pdf

1、蘇云金芽胞桿菌(Bacillus thuringiensis,簡稱Bt)為革蘭氏陽性菌,由于它可在不同生長時期分泌和形成高效殺蟲蛋白,包括營養(yǎng)期分泌的殺蟲蛋白(Vips),以及在對數(shù)生長期即芽胞形成的同時,形成由cry基因編碼的殺蟲晶體蛋白(ICPs),使其成為了一種殺蟲效果好、安全的殺蟲微生物,并且已在微生物殺蟲劑、轉(zhuǎn)基因等方面得到了廣泛的應(yīng)用。
　　 為能獲得對小地老虎(Agrotisypsilon)有高致死活性的蘇云金芽胞

2、桿菌,并為微生物殺蟲劑提供良好的材料,本研究以標(biāo)準(zhǔn)菌株庫斯塔克亞種(B.thuringiensis subsp.kurstaki)HD-1為對照菌株,以及4株對小地老虎有高生測致死活性的候選菌株P(guān)S9-D12、PS9-C12、PS9-D11、PS9-H9共5株Bt菌,分別對比分析了菌株生長情況、基因類型、蛋白表達類型、以及生物活性。
　　 通過對菌株的生長情況的對比,菌株生長曲線顯示,菌株P(guān)S9-H9與HD-1有較高且相似的生長

3、速度和生物產(chǎn)量,而PS9-D12的最低；分別通過PCR-RFLP和基因測序比對對菌株含有的基因類型進行分析,結(jié)果PS9-D12、PS9-C12含有的基因類型豐富,包括crylA／crylI,cry2A、vip2A和vip3A,同時獲得3個新基因:crylAa17、crylAa18、cry2Ab17；菌株蛋白經(jīng)MALDI-TOF-MS分析,PS9-D12、PS9-C12均檢測到殺蟲蛋白CrylAa、CrylAc、Cry2Ab,菌株P(guān)S9-

4、H9僅檢測到CrylAc的表達,并發(fā)現(xiàn)PS9-D12、PS9-C12中可能含有其他新基因。
　　 分別制備不同生測樣品測定對小地老虎的毒力,使用菌株HD—1、PS9-D12、PS9-C12、PS9-D11、PS9-H9的胞晶混合凍干粉(mg.g-1)LC50為:0.71、0.19、0.14、0.24、1.16,芽胞凍干粉(mg.g-1)LC50為:4.21、2.55、2.99、4.03、6.55,生測數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS軟件分析,菌株

5、PS9-D12、PS9-C12的胞晶混合凍干粉與其他菌株生測樣品的生測結(jié)果差異極顯著(P<0.05),說明菌株P(guān)S9-D12、PS9-C12相對于HD-1有很好的生測活性:另外對初孵甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)、2齡小菜蛾(Plutella xylostella)進行生測,結(jié)果菌株P(guān)S9-D12、PS9-C12同樣具有很好的殺蟲活性,但是對2齡大猿葉甲(Colaphellusbowringi)無活性。
　　 最