寡肽接頭分子生物催化合成的研究.pdf

1、本文開(kāi)展了在體外用法尼基轉(zhuǎn)移酶催化人工合成的寡肽與法尼基焦磷酸(FPP)的合成研究，即合成我們需要的寡肽接頭分子。接頭分子是一個(gè)連接酵母細(xì)胞和抗體的一個(gè)橋梁，合成出的接頭分子是酵母細(xì)胞流式陣列的一個(gè)重要元件，為以后的酵母流式陣列的構(gòu)建打下基礎(chǔ)。這項(xiàng)研究?jī)?nèi)容包括對(duì)需要的寡肽的合成設(shè)計(jì)、反應(yīng)體系的優(yōu)化及寡肽接頭分子的分離。在寡肽的合成設(shè)計(jì)過(guò)程中，主要考慮法尼基轉(zhuǎn)移酶對(duì)催化的底物的結(jié)構(gòu)要求、流式陣列中酵母細(xì)胞必須具備的結(jié)合抗體的能力要求(寡肽

2、需含有游離的羧基)以及在制作寡肽標(biāo)準(zhǔn)曲線中便于檢測(cè)的原則來(lái)設(shè)計(jì)。對(duì)反應(yīng)體系的優(yōu)化實(shí)驗(yàn)中，主要進(jìn)行了兩部分實(shí)驗(yàn)：一是單因素實(shí)驗(yàn)部分，首先確定溫度、pH對(duì)法尼基轉(zhuǎn)移酶活性的影響，確定適宜的反應(yīng)溫度和反應(yīng)體系的pH;另外一部分是通過(guò)做三因素三水平正交試驗(yàn)，在寡肽濃度飽和的條件下研究另一個(gè)底物 FPP濃度、加入的法尼基轉(zhuǎn)移酶的濃度、反應(yīng)時(shí)間對(duì)合成我們需要的寡肽接頭分子的量的影響，以確定最優(yōu)反應(yīng)體系。合成出寡肽接頭分子后，通過(guò)凝膠層析法除去反應(yīng)體