動物性食品中氨苯砜免疫快速檢測技術(shù)的研究.pdf

1、氨苯砜(dapsone，DDS)為砜類抑菌劑，大劑量使用時會顯示出較強的殺菌作用，常被用來預(yù)防和治療動物疾病。但是氨苯砜的毒性較大，會引起血液系統(tǒng)反應(yīng)，會對某些器官造成一定的損害，最嚴(yán)重的甚至可以導(dǎo)致人體死亡，因此我國農(nóng)業(yè)部規(guī)定禁止在所有食品動物中使用，且不得在動物性食品中檢出;歐盟2377/90、37/2010也明確規(guī)定氨苯砜是禁用藥物。本文設(shè)計合成DDS人工抗原，制備出了針對DDS的多克隆抗體，初步建立了檢測DDS的dcELISA法

2、和GICA法，兩者對DDS的殘留進行快速檢測都表現(xiàn)出較好的靈敏度和特異性。
　　利用重氮化法將DDS與牛血清白蛋白(BSA)進行偶聯(lián)制備出免疫原DDS-BSA，利用戊二醛法將DDS與卵清蛋白(OVA)進行偶聯(lián)制備出包被原DDS-OVA，采用過碘酸鈉法將DDS與HRP相連制備了酶標(biāo)抗原DDS-HRP。用免疫原DDS-BSA對健康的新西蘭大耳白兔進行多點免疫。免疫三個月后，新西蘭大耳白兔產(chǎn)生的抗血清效價為1∶12800，將抗血清用Pr

3、oteinA-Sepharose4B凝膠柱親和層析法進行純化，得到針對DDS的單一特異性抗體。
　　通過對包被抗體濃度及酶標(biāo)抗原稀釋濃度、封閉液、離子濃度、pH值及乙腈含量等條件進行優(yōu)化，在最優(yōu)條件下，建立了DDS的直接競爭酶聯(lián)免疫吸附法，該方法IC50為2.96μg/L，IC15為0.02μg/L，與二苯砜、4，4—二羥基二苯砜、磺胺和磺胺嘧啶等結(jié)構(gòu)類似物的交叉反應(yīng)率分別為1.38％、0.75％、17.22％和11.17％，表明

4、此方法具有較高的特異性，板內(nèi)變異系數(shù)范圍為3.47％～12.12％，板間變異系數(shù)范圍為5.22％～12.16％，證明該法的穩(wěn)定性較好。牛奶需10倍稀釋、蜂蜜需5倍稀釋、豬肉和雞蛋需吹干后復(fù)溶，可有效消除基質(zhì)。設(shè)三個水平，結(jié)果ELISA回收率在75.45％～90.48％之間，通過常規(guī)的HPLC法對ELISA結(jié)果進行驗證，結(jié)果顯示R2為0.9937。證明，所建立的直接競爭ELISA方法可以用來對動物源性食品中殘留的DDS進行快速定量檢測。<