分子機(jī)器在腫瘤標(biāo)志物檢測中的應(yīng)用研究.pdf

1、Micro RNAs(miRNAs)是一類內(nèi)生的非蛋白編碼RNA分子，大約18-24核苷酸長，在植物、人類和動(dòng)物的組織中都有發(fā)現(xiàn)，通過與mRNA3'端非編碼區(qū)綁定結(jié)合導(dǎo)表現(xiàn)致mRNA退化或者抑制，所以miRNAs在轉(zhuǎn)錄后基因調(diào)控中扮演著重要作用。miRNAs在癌癥檢測和鍵入方面有著重要意義，發(fā)展靈敏的、特異性的、定量的、低成本的檢測miRNAs的方法是很有必要的。分子信標(biāo)(MB)，一種專門設(shè)計(jì)的DNA發(fā)夾結(jié)構(gòu)，已經(jīng)被廣泛的運(yùn)用于生物傳感

2、器的發(fā)展，DNA、RNA、蛋白質(zhì)、金屬離子甚至腫瘤細(xì)胞等靶的分析檢測。
　　本文主要開展了以下兩個(gè)方面的工作:
　　一、基于啞鈴型探針滾環(huán)-剪切-復(fù)制技術(shù)檢測miRNA的研究
　　本章基于啞鈴型探針滾環(huán)-剪切-復(fù)制技術(shù)，建立了一種高效的超靈敏免標(biāo)記檢測miRNAs的方法（以let-7a miRNA作為分析物）。該方法通過啞鈴探針綁定目標(biāo)miRNAs環(huán)化，進(jìn)而引發(fā)滾環(huán)循環(huán)放大(RCA)和一個(gè)自發(fā)的剪切，聚合，取代分子機(jī)器

3、過程，生成大量的HRP-DNA模擬酶序列，可與hemin結(jié)合，以ABTS2--H2O2為反應(yīng)底物，產(chǎn)生紫外-可見信號。本方法靈敏度高(檢測限可達(dá)1zmol)、線性范圍寬（可達(dá)9個(gè)數(shù)量級）、特異性號（可檢測單堿基錯(cuò)配）、操作簡單（僅需一個(gè)探針和三種酶），并成功應(yīng)用于let-7a miRNA實(shí)際樣品的檢測(人體肺部組織總RNA)，為miRNAs用于基因表達(dá)和分子診斷，特別是癌癥早期診斷提供了一種新方法。
　　二、基于自組裝DNA分子機(jī)

4、器循環(huán)放大技術(shù)檢測DNA、Ramos細(xì)胞、溶菌酶的研究
　　本章基于自組裝DNA分子機(jī)器循環(huán)放大技術(shù)，建立了一種高效的檢測靶DNA的方法，該方法通過靶DNA與莖環(huán)1反應(yīng)打開莖環(huán)，再與莖環(huán)2、circle1雜交成環(huán)，在DNA聚合酶和DNA內(nèi)切酶存在下，一邊發(fā)生滾環(huán)復(fù)制，一邊發(fā)生DNA剪切-復(fù)制擴(kuò)增，生成大量HRP-DNA模擬酶，與hemin特異性結(jié)合，以ABTS2--H2O2為反應(yīng)底物，產(chǎn)生紫外-可見信號。從而實(shí)驗(yàn)了對靶DNA的免標(biāo)