一種新型抗真菌抗生素的分離純化與結(jié)構(gòu)鑒定.pdf

1、真菌感染發(fā)病率大幅度上升，尤其是深部真菌感染，正不斷威脅著人類的健康。所以，尋求新型、高效、安全的抗真菌藥物的研究迫在眉睫。課題組篩選得到一株芽孢桿菌B.subtilis CGMCC4140，能產(chǎn)生抗真菌抗生素，對引起深部真菌感染的白色念珠菌具有很好的抑制作用。本文對抗真菌物質(zhì)進(jìn)行了分離純化，并對其進(jìn)行了結(jié)構(gòu)鑒定，為該抗生素的進(jìn)一步研究和開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。
　　本文首先對發(fā)酵液中抗生素穩(wěn)定性進(jìn)行了測定，研究了放置時(shí)間、溫度、pH、光

2、照對其抑菌效果的影響，并進(jìn)行HPLC分析，結(jié)果顯示:該抗生素穩(wěn)定性較高。
　　分離純化工藝首先對發(fā)酵液進(jìn)行了預(yù)處理，發(fā)酵液經(jīng)5000 r/min離心15min除去菌體細(xì)胞、未用完培養(yǎng)基等雜質(zhì)后，選用濃度0.06 g/L聚丙烯酰胺為絮凝劑除去殘留在發(fā)酵液中的菌體碎片、膠體蛋白等物質(zhì)。預(yù)處理過的發(fā)酵液用大孔樹脂吸附層析法進(jìn)行初步分離，選用大孔吸附樹脂HP20作為大孔吸附劑，然后對其靜態(tài)吸附性能與動(dòng)態(tài)洗脫效果進(jìn)行研究，優(yōu)化后的工藝條件為

3、:上樣液以1.5BV/h(55cm/h)的流速上柱，在吸附達(dá)到平衡后用去離子水沖洗，再用10％的乙醇-水溶液以相同流速洗脫，收率為83.9％。粗提物經(jīng)過C18反相層析獲得純品，純度達(dá)到96.21％，最終效價(jià)達(dá)到17861.8 U/mg（相當(dāng)于制霉菌素2.7mg/mg）。
　　抗生素通過質(zhì)譜、核磁共振等分析手段，得知該化合物分子量為402 Da，分子式為C24H34O5，為一種新型大環(huán)內(nèi)酯類抗真菌抗生素。對不同菌種抑菌實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)該抗生