食用油品種溯源分子分型技術(shù)研究.pdf

1、近年來(lái),隨著食品安全事故的頻發(fā),食品安全已經(jīng)越來(lái)越成為人們關(guān)注的焦點(diǎn)。我國(guó)居民食用油消費(fèi)量巨大,且橄欖油等食用植物油進(jìn)口量不斷攀升,食用油的消費(fèi)已經(jīng)與人們的生活密不可分。食用油摻假摻雜不僅潛在地威脅著人們的身體健康,而且侵犯消費(fèi)者利益,影響消費(fèi)信心,不利于食用油產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。目前檢測(cè)方法中理化方法雖然較為快速,但其樣品數(shù)量大、需建立數(shù)據(jù)庫(kù)、準(zhǔn)確定度低、易受環(huán)境因素影響,且大多使用有毒溶劑,存在一定的局限性。因此,食用油質(zhì)量安全具有亟待

2、解決的必要性。
　　 針對(duì)目前市場(chǎng)上頻繁出現(xiàn)的食用油摻假行為,本論文以常見(jiàn)的食用油和油料為研究對(duì)象,結(jié)合常規(guī)PCR、實(shí)時(shí)熒光PCR、CE-SSCP及RAPD等分子生物技術(shù),研究建立橄欖、大豆、花生、玉米、芝麻、菜籽、葵花、核桃、松子、大米和棉籽11種常見(jiàn)油料和橄欖油、大豆油、花生油、玉米油、芝麻油、葵花油6種常見(jiàn)食用油的品種溯源DNA指紋檢測(cè)方法——PCR-CE-SSCP方法,旨在構(gòu)建快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確和高效的食用油摻假分子生物學(xué)

3、鑒別技術(shù)體系,為食用油質(zhì)量監(jiān)管和控制提供科學(xué)手段。主要內(nèi)容如下:
　　 1.不同油料的DNA指紋檢測(cè)方法-PCR-CE-SSCP方法的建立。設(shè)計(jì)并篩選了橄欖、大豆、花生、芝麻、玉米、葵花、菜籽、大米、核桃、松子和棉籽11個(gè)品種食用油原料作物的通用引物rbc11和uni4,優(yōu)化實(shí)驗(yàn)方法,并研究方法的特異性、分辨率、靈敏度和穩(wěn)定性。
　　 2.利用PCR-CE-SSCP方法對(duì)橄欖油進(jìn)行摻假檢測(cè)。利用PCR-CE-SSCP方法

4、分析的橄欖油和橄欖的信號(hào)峰一致,說(shuō)明本方法對(duì)橄欖油具有良好的適用性。本實(shí)驗(yàn)將玉米油、大豆油等食用油不同比例的摻入橄欖油中,結(jié)果顯示PCR-CE-SSCP方法最低可以檢測(cè)到10％(V/V)的大豆油和30％(V/V)的玉米油。利用PCR-CE-SSCP方法對(duì)14種市售橄欖油樣品檢測(cè)顯示,大部分橄欖油中存在大豆等非橄欖成分,且與克隆測(cè)序分析結(jié)果一致。
　　 3.利用PCR-CE-SSCP方法對(duì)大豆油等其他油進(jìn)行摻假檢測(cè)。本實(shí)驗(yàn)利用PC

5、R-CE-SSCP方法對(duì)大豆、花生、芝麻、玉米、葵花、和大豆油、花生油、芝麻油、玉米油、葵花油進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果顯示5種油料和油的信號(hào)峰一致,顯示了方法對(duì)各種油良好的適用性。實(shí)驗(yàn)將大豆油不同比例分別摻入葵花油和芝麻油中,結(jié)果顯示PCR-CE-SSCP方法最低均可檢測(cè)到10％(V/V)的大豆油。用PCR-CE-SSCP方法對(duì)2種市售調(diào)和油樣品檢測(cè)顯示,除所標(biāo)識(shí)成分之外,還存在其他成分。
　　 4.食用油儲(chǔ)藏時(shí)間對(duì)PCR-CE-SSCP

6、的影響。本實(shí)驗(yàn)利用RAPD和PCR-CE-SSCP對(duì)常溫儲(chǔ)藏條件下橄欖油中DNA隨儲(chǔ)存時(shí)間（生產(chǎn)后13-18個(gè)月）的降解規(guī)律進(jìn)行初探,結(jié)果顯示在橄欖油儲(chǔ)存的15個(gè)月內(nèi),PCR-CE-SSCP完全適合橄欖油的摻假檢測(cè)。
　　 本方法從基因角度對(duì)不同品種的食用油進(jìn)行真?zhèn)舞b別,從根本上避免了品系、種植環(huán)境、季節(jié)、產(chǎn)地等客觀(guān)因素的影響,準(zhǔn)確性高;使用通用引物能夠同時(shí)對(duì)多種油料物種同時(shí)進(jìn)行鑒別,與理化方法相比,其適用性更廣,操作更加省時(shí)省