重組里氏木霉產(chǎn)耐高溫漆酶的研究.pdf

1、漆酶(Laccase，EC1.10.3.2)是一種含銅的多酚類氧化酶，具有廣泛的底物特異性，是一種環(huán)境友好的綠色催化劑，有重要的工業(yè)應(yīng)用價值。本文對實驗室前期獲得的10株重組里氏木霉轉(zhuǎn)化子進(jìn)行了搖瓶產(chǎn)酶篩選，得到了一株高產(chǎn)漆酶的轉(zhuǎn)化子T.reeseiZU-L10。對該菌株的搖瓶產(chǎn)酶條件進(jìn)行了初步優(yōu)化，并對漆酶的酶學(xué)特性及其在金橙Ⅱ、活性艷藍(lán)KN-R脫色應(yīng)用進(jìn)行了研究，主要研究結(jié)果如下:
　　對重組T.reeseiZU-L10產(chǎn)漆酶

2、的發(fā)酵培養(yǎng)基和發(fā)酵條件進(jìn)行了優(yōu)化，獲得產(chǎn)漆酶培養(yǎng)基適宜組合:乳糖30g/L，酵母浸出粉5g/L，酒石酸銨2.8g/L，MgSO4·7H2O0.6g/L,CaCl2·2H2O0.8g/L,KH2PO44g/L,CuSO4·5H2O0.25g/L。適宜發(fā)酵條件:接種量5％、發(fā)酵溫度28℃，自然pH(5.5)。以優(yōu)化后的培養(yǎng)基在適宜的培養(yǎng)條件下?lián)u瓶發(fā)酵96h，重組T.reeseiZU-L10產(chǎn)漆酶酶活達(dá)到8.85IU/mL，比優(yōu)化前的1.32

3、IU/mL提高了約6.7倍。
　　研究了重組T.reeseiZU-L10漆酶的酶學(xué)特性，通過對其進(jìn)行SDS-PAGE電泳，結(jié)果表明該漆酶的分子質(zhì)量約為68kDa。漆酶的最適溫度為65℃，且具有良好的耐熱性能，經(jīng)70℃處理60min后殘余相對酶活仍維持在70％以上;最適pH2.5，在pH值為3.5時漆酶的穩(wěn)定性最好。Li+、Zn2+、Mg2+、K+、Co2+、Ba2+和Cu2+對重組T.reeseiZU-L10漆酶活性有促進(jìn)作用，而

4、Fe2+、Mn2+、Ca2+和Na+對其具有抑制作用。以ABTS為底物時，測定該酶的米氏常數(shù)Km值為14.7μM，最大反應(yīng)速度Vmax值為4.593mM/min。
　　初步探究了重組T.reeseiZU-L10漆酶對偶氮染料金橙Ⅱ、蒽醌染料活性艷藍(lán)KN-R的脫色條件。漆酶協(xié)同小分子介體HOBT對金橙Ⅱ(100mg/L)脫色降解5h脫色率達(dá)到90.6％，漆酶直接處理活性艷藍(lán)KN-R(100mg/L)，反應(yīng)5h脫色率達(dá)到87％。對兩種