竹筍多糖的提取、純化、結(jié)構(gòu)及體外生物活性的研究.pdf

1、本文以竹筍為原料，研究了竹筍多糖的提取、分離純化、結(jié)構(gòu)及體外生物活性。主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下:
　　 1、竹筍多糖的提取和分離純化工藝研究。首先，采用水提法提取竹筍多糖。分別考察了液固比、提取溫度、提取時間、浸提次數(shù)和95％乙醇添加倍數(shù)五個因素對多糖提取率的影響;在此基礎上，以液固比、提取溫度、提取時間和95％乙醇添加倍數(shù)為因素，采用正交試驗，確定了竹筍多糖最佳提取工藝條件，即液固比15∶1，提取溫度100℃，提取時間4h，95

2、％乙醇添加倍數(shù)4，在此條件下多糖提取率為7.58％。然后，將浸提液離心取上清液，再依次采用Sevage法脫蛋白，大孔樹脂吸附法脫色，透析法脫鹽，95％乙醇沉淀，冷凍干燥得到竹筍粗多糖(WBP)。采用DEAE-cellulose-52層析柱對WBP作進一步的分離，用蒸餾水和不同濃度NaCl溶液洗脫，將最大的兩個洗脫峰對應的洗脫液分別收集、濃縮和冷凍干燥，得到兩種主要組分，并用Sephadex G-100進一步純化得到兩種組分（WBP1和W

3、BP2）。脫蛋白實驗結(jié)果表明，最佳脫蛋白次數(shù)是4次。比較AB-8和D101兩種樹脂的脫色效果，結(jié)果表明，D101為最佳脫色大孔樹脂，當D101樹脂∶多糖濃縮液=3∶5(g/mL)時，脫色效果較好。
　　 2、竹筍多糖的化學組成和結(jié)構(gòu)的初步研究?？疾炝薟BP1和WBP2的總糖、蛋白質(zhì)、硫酸根和糖醛酸含量。用高效液相色譜(HPLC)進一步證實，WBP1和WBP2均為多糖單組分，分子量分別為83.44kDa和80.01kDa。采用氨基

4、酸全自動分析儀分析了兩者的氨基酸組成，兩者都含有天冬氨酸、蘇氨酸、絲氨酸和精氨酸等15種氨基酸，且丙氨酸含量最高;用傅立葉紅外光譜初步判斷兩者為糖類化合物，且含有羰基、-CH、C-O-C和-OH;用GC確定兩者的單糖組成，WBP1和WBP2是雜多糖，都含有鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖6種單糖，其摩爾比分別約為5.05∶6.06∶10.13∶97.19∶28.11∶33.41和4.39∶13.65∶12.43∶55.34

5、∶4.16∶27.33。
　　 3、竹筍多糖的體外抗氧化活性研究。通過對羥基自由基、超氧陰離子自由基和過氧化氫的清除作用及還原力的體外抗氧化活性研究，結(jié)果表明，WBP1和WBP2不僅對羥基自由基、超氧陰離子自由基和過氧化氫都表現(xiàn)出一定的清除作用，而且有一定的還原力。此外，還發(fā)現(xiàn)對羥基自由基和超氧陰離子自由基的清除作用和多糖分子中蛋白質(zhì)含量之間，還原力和硫酸根含量之間存在正相關性;對過氧化氫的清除作用和多糖的相對分子質(zhì)量之間存在負

6、相關性。
　　 4、竹筍多糖的免疫活性研究。通過四甲基偶氮唑鹽比色法（MTT法）評價WBP1和WBP2對小鼠脾淋巴細胞增殖的影響，進而評價其免疫活性。結(jié)果表明，WBP1和WBP2能增強小鼠脾淋巴細胞的增殖能力。當濃度為200μg/mL時，對脾淋巴細胞的增殖作用達到最大。
　　 5、竹筍多糖對雙歧桿菌體外生長情況的研究。以兩歧雙歧桿菌和青春雙歧桿菌為考察對象，培養(yǎng)基OD值和pH值為評價指標，研究WBP1和WBP2對雙歧桿菌

7、體外生長的影響。結(jié)果表明，WBP1和WBP2對兩種雙歧桿菌的體外生長有一定的促進作用，是一種潛在的有效益生元。竹筍多糖作為雙歧桿菌培養(yǎng)基的營養(yǎng)源，當WBP1和WBP2濃度分別為2.0％和3.0％時，對兩歧雙歧桿菌增殖效果最好;WBP1和WBP2濃度為2.0％時，對青春雙歧桿菌的增殖效果最好。另外，雙歧桿菌發(fā)酵竹筍多糖，產(chǎn)生乳酸等，使培養(yǎng)基的pH值降低。對兩種雙歧桿菌生長曲線的研究發(fā)現(xiàn)，竹筍多糖WBP1對雙歧桿菌的促進作用比WBP2好;以