致敏性青霉素降解物定性免疫分析方法的研究.pdf

1、本論文研究建立了致敏性青霉素降解物——青霉噻唑酸的膠體金免疫層析試紙條和免疫親和凝膠檢測柱兩種定性檢測方法。
　　采用檸檬酸三鈉還原法制備了17nm膠體金，優(yōu)化制備金標(biāo)抗體的最佳pH為9，標(biāo)記抗體量為36μg。包被抗原和羊抗兔二抗分別作為檢測帶和質(zhì)控帶包被在硝酸纖維素膜上。金標(biāo)記抗體噴涂在結(jié)合釋放墊上，制成青霉噻唑酸膠體金免疫層析快速檢測試紙條。通過對(duì)試紙條工作條件的優(yōu)化確定最優(yōu)條件為:金標(biāo)抗體的稀釋倍數(shù)為1∶5，包被抗原的稀釋倍

2、數(shù)為1∶1，羊抗兔二抗稀釋倍數(shù)為1∶100，包被原稀釋液中甲醇濃度為3％。選擇硝酸纖維素膜Millipore HF180作為固相載體。對(duì)硝酸纖維素膜不進(jìn)行封閉處理。選擇金標(biāo)結(jié)合釋放墊處理液為含有0.5％ TritonX-100、0.1％ PVP、2％BSA和5％蔗糖的PB緩沖液。樣品稀釋液為含5％甲醇的PB緩沖液。
　　建立了青霉噻唑酸膠體金免疫層析試紙條檢測方法。方法的檢測限為試紙條檢測線顏色與質(zhì)控線顏色通過目視可觀察到的明顯差

3、別時(shí)青霉噻唑酸的濃度。最終確定方法目視檢測限為10μg/L，檢測時(shí)間為10min。與氯霉素、三聚氰胺等其他牛奶中常檢藥物均無交叉反應(yīng)，特異性良好。牛奶和奶粉樣品經(jīng)簡單離心處理后通過試紙條檢測，檢測限分別為10μg/L和40μg/kg。
　　以瓊脂糖凝膠為固相載體，通過抗體和溴化氰活化的瓊脂糖凝膠偶聯(lián)制備抗體膠作為檢測層，HRP多克隆抗體與溴化氰活化的瓊脂糖凝膠偶聯(lián)制備HRP抗體膠作為質(zhì)控層，制備免疫親和凝膠檢測柱。并對(duì)工作條件進(jìn)行

4、了優(yōu)化，最終確定最優(yōu)工作條件為:抗體膠稀釋倍數(shù)為1∶10，抗HRP膠稀釋倍數(shù)為1∶200，酶標(biāo)稀釋倍數(shù)為1∶10000，樣品稀釋液為pH5.7的PBS，清洗體積為5 mL。
　　建立了青霉噻唑酸免疫親和凝膠檢測柱分析方法。方法檢出限為檢測層藍(lán)色消失時(shí)青霉噻唑酸的濃度，為10μg／L，整個(gè)檢測過程不超過10 min。與氯霉素等常見抗生素均無交叉反應(yīng)，特異性良好。選取了牛奶作為檢測樣品，樣品經(jīng)過離心后直接檢測，牛奶樣品檢測限為10μg