致敏性青霉素降解物定性免疫分析方法的研究.pdf

1、本論文研究建立了致敏性青霉素降解物——青霉噻唑酸的膠體金免疫層析試紙條和免疫親和凝膠檢測(cè)柱兩種定性檢測(cè)方法。
　　采用檸檬酸三鈉還原法制備了17nm膠體金，優(yōu)化制備金標(biāo)抗體的最佳pH為9，標(biāo)記抗體量為36μg。包被抗原和羊抗兔二抗分別作為檢測(cè)帶和質(zhì)控帶包被在硝酸纖維素膜上。金標(biāo)記抗體噴涂在結(jié)合釋放墊上，制成青霉噻唑酸膠體金免疫層析快速檢測(cè)試紙條。通過(guò)對(duì)試紙條工作條件的優(yōu)化確定最優(yōu)條件為:金標(biāo)抗體的稀釋倍數(shù)為1∶5，包被抗原的稀釋倍

2、數(shù)為1∶1，羊抗兔二抗稀釋倍數(shù)為1∶100，包被原稀釋液中甲醇濃度為3％。選擇硝酸纖維素膜Millipore HF180作為固相載體。對(duì)硝酸纖維素膜不進(jìn)行封閉處理。選擇金標(biāo)結(jié)合釋放墊處理液為含有0.5％ TritonX-100、0.1％ PVP、2％BSA和5％蔗糖的PB緩沖液。樣品稀釋液為含5％甲醇的PB緩沖液。
　　建立了青霉噻唑酸膠體金免疫層析試紙條檢測(cè)方法。方法的檢測(cè)限為試紙條檢測(cè)線顏色與質(zhì)控線顏色通過(guò)目視可觀察到的明顯差

3、別時(shí)青霉噻唑酸的濃度。最終確定方法目視檢測(cè)限為10μg/L，檢測(cè)時(shí)間為10min。與氯霉素、三聚氰胺等其他牛奶中常檢藥物均無(wú)交叉反應(yīng)，特異性良好。牛奶和奶粉樣品經(jīng)簡(jiǎn)單離心處理后通過(guò)試紙條檢測(cè)，檢測(cè)限分別為10μg/L和40μg/kg。
　　以瓊脂糖凝膠為固相載體，通過(guò)抗體和溴化氰活化的瓊脂糖凝膠偶聯(lián)制備抗體膠作為檢測(cè)層，HRP多克隆抗體與溴化氰活化的瓊脂糖凝膠偶聯(lián)制備HRP抗體膠作為質(zhì)控層，制備免疫親和凝膠檢測(cè)柱。并對(duì)工作條件進(jìn)行

4、了優(yōu)化，最終確定最優(yōu)工作條件為:抗體膠稀釋倍數(shù)為1∶10，抗HRP膠稀釋倍數(shù)為1∶200，酶標(biāo)稀釋倍數(shù)為1∶10000，樣品稀釋液為pH5.7的PBS，清洗體積為5 mL。
　　建立了青霉噻唑酸免疫親和凝膠檢測(cè)柱分析方法。方法檢出限為檢測(cè)層藍(lán)色消失時(shí)青霉噻唑酸的濃度，為10μg／L，整個(gè)檢測(cè)過(guò)程不超過(guò)10 min。與氯霉素等常見(jiàn)抗生素均無(wú)交叉反應(yīng)，特異性良好。選取了牛奶作為檢測(cè)樣品，樣品經(jīng)過(guò)離心后直接檢測(cè)，牛奶樣品檢測(cè)限為10μg