Let--7b在結(jié)核性腦膜炎腦脊液外泌體中表達(dá)水平的研究.pdf

1、目的:
　　結(jié)核病目前仍然是一個全球性的公眾健康問題，而這其中最致命和致殘的結(jié)核病形式是結(jié)核性腦膜炎(tuberculous meningitis TBM)，保守估計每年超過約100，000例新發(fā)病例。結(jié)核性腦膜炎是一種由結(jié)核分支桿菌通過血液傳播擴(kuò)散引起的非化膿性腦脊膜的炎性疾病。然而，近年來由于結(jié)核桿菌的基因突變、抗結(jié)核桿菌藥物的研發(fā)遲滯、耐藥性結(jié)核桿菌的出現(xiàn)等，相關(guān)報道顯示國內(nèi)外結(jié)核性腦膜炎的發(fā)病率和死亡率并未明顯降低。由于結(jié)

2、核性腦膜炎的誤診及延遲治療十分嚴(yán)重，早期確診具有重要的臨床意義。
　　病毒性腦膜炎是神經(jīng)內(nèi)科常見的顱內(nèi)感染性疾病，由一種或多種病毒感染引起的腦膜急性或亞急性炎性疾病。主要表現(xiàn)為發(fā)燒、頭痛、嘔吐、抽搐、意識障礙等癥狀。隨著細(xì)菌性腦膜炎的發(fā)病率的下降，病毒性腦膜炎成為臨床最常見的無菌性腦膜炎。臨床上柯薩奇病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒、?？刹《镜饶c道病毒感染多見，除此之外還有腺病毒、巨細(xì)胞病毒、皰疹病毒等其他病毒感染，隨診分子診斷學(xué)的臨床應(yīng)用，

3、大大提高了病毒性腦膜炎的病原體的檢測速度。
　　外泌體是一種可由多種細(xì)胞分泌到胞外的納米級囊泡體，廣泛存在于患者血液、腦脊液、尿液以及胸腔積液等不同體液中，含有豐富的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、核酸等物質(zhì)，作為一種新型的細(xì)胞物質(zhì)交換、信息傳遞載體，不僅參與中樞神經(jīng)系統(tǒng)正常的生理過程，同時也參與中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的發(fā)生發(fā)展、損傷修復(fù)等過程。微小RNA(miRNA)是細(xì)胞內(nèi)大小約21到25個核苷酸構(gòu)成的非編碼RNA，由內(nèi)源基因編碼，具有高度保守性，主

4、要與靶基因mRNA相結(jié)合，是主要的基因表達(dá)調(diào)控分子之一。Let-7家族是第一個已知的人類miRNA，通過干預(yù)細(xì)胞的分裂、增殖以及分化、凋亡等過程，進(jìn)而對靶基因的表達(dá)進(jìn)行調(diào)控。而let-7b作為let-7家族中的成員之一，其在神經(jīng)系統(tǒng)中的非正常表達(dá)與神經(jīng)系統(tǒng)多種疾病密切相關(guān)。本研究通過分離提取結(jié)核性腦膜炎、病毒性腦膜炎及正常對照者腦脊液外泌體中l(wèi)et-7b，來觀察let-7b的表達(dá)水平，探尋腦膜炎新的生物學(xué)診斷標(biāo)志物。
　　方法:<

5、br>　　收集本院神經(jīng)科2017-2018年期間住院的15例結(jié)核性腦膜炎患者、15例病毒性腦膜炎患者、15例正常腦脊液患者，將其分組為結(jié)腦組、病腦組、對照組，收集5mL腦脊液標(biāo)本。采取ExoQuick Precipitation提取劑分離提純外泌體，采用透射電子顯微鏡觀察不同組外泌體形態(tài)，應(yīng)用qRT-PCR法檢測各組腦脊液外泌體中l(wèi)et-7b相對表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　1.結(jié)核性腦膜炎和病毒性腦膜炎及對照組腦脊液中均可以

6、檢測到外泌體，透射電鏡下呈圓形或橢圓形，直徑約30～100nm。熒光定量PCR檢測發(fā)現(xiàn)3組腦脊液外泌體中均可檢測到let-7b。
　　2.結(jié)腦組腦脊液外泌體中l(wèi)et-7b的表達(dá)顯著低于對照組，差異具有明顯統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　3.病腦組與對照組相比，病腦組let-7b表達(dá)下調(diào)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　4.結(jié)腦組與病腦組相比，結(jié)腦組let-7b表達(dá)下調(diào)，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。<