皺紋盤(pán)鮑性腺抗氧化肽的制備及其活性分析.pdf

1、橐萎夫?qū)W工程碩士專(zhuān)業(yè)學(xué)位論文皺紋盤(pán)鮑性腺抗氧化肽的制備及其活性分析PreparationandresearchonantioxidantpeptidesfromhydroIySateSofPacificabalone(Haliotisdiscushanna刁gonads論文答辯日期：2Q曼壘生魚(yú)月量旦皺紋盤(pán)鮑性腺抗氧化肽的制備及其活性分析摘要長(zhǎng)期以來(lái)，皺紋盤(pán)鮑是我國(guó)重要的海洋經(jīng)濟(jì)貝類(lèi)之一，鮑魚(yú)的加工與食用以腹足為主。在鮑魚(yú)的加工過(guò)程中，

2、占總重量1525％的內(nèi)臟沒(méi)有得到充分利用。利用鮑魚(yú)加工副產(chǎn)物為原料，制備具有抗氧化功能的生物活性肽，開(kāi)發(fā)功能性食品，達(dá)到減少生物資源浪費(fèi)，同時(shí)提高產(chǎn)品附加值。本文以鮑魚(yú)性腺為原料，通過(guò)可控酶解技術(shù)制備抗氧化肽，并利用3種體外化學(xué)模型(DPPH清除能力，OH清除能力和Fe2還原力)綜合評(píng)價(jià)了鮑魚(yú)性腺小肽的抗氧化活性，同時(shí)采用超濾、凝膠色譜、反相高效液相色譜(I沖HPLC)等分離技術(shù)對(duì)鮑魚(yú)性腺小肽進(jìn)行分離純化及分子量鑒定。采用木瓜蛋白酶、中

3、性蛋白酶、堿性蛋白酶、胰蛋白酶、復(fù)合蛋白酶5種蛋白酶酶解鮑魚(yú)性腺，酶解效果通過(guò)SDSPAGE電泳分析和DPPH清除能力評(píng)價(jià)。篩選得到酶解效果較好的為木瓜蛋白酶和復(fù)合蛋白酶，并優(yōu)化兩種酶酶解條件。最終確定兩種酶解方案：其中，雙酶法最佳酶解工藝條件是：第一次酶解所用為木瓜蛋白酶，加酶量05％(3975U／g)，溫度60℃，反應(yīng)時(shí)間2h，pH70，料液比1：10，第二次酶解所用為復(fù)合蛋白酶，加酶量1％(3670U／g)，反應(yīng)時(shí)間2h；單酶法最

4、佳酶解工藝條件是：木瓜蛋白酶加酶量2％(15900U／g)，溫度50℃，pH60，料液比為1：10，反應(yīng)時(shí)間2h。3種體外化學(xué)模型綜合評(píng)估單酶法制備的鮑魚(yú)性腺小肽的抗氧化活性，結(jié)果表明：在O10mg／mL濃度范圍內(nèi)，鮑魚(yú)性腺酶解液對(duì)DPPH的清除能力較強(qiáng)，其IC50值為585mg／mL；在OH清除能力上，酶解液清除力與Vc相當(dāng)，兩者的IC50值分別為07mg／mL和05mg／mL；而酶解液也具備一定的還原能力，其ACo5值為78mg／m

5、L。利用30KDa和5kDa超濾、SepahdexG25、SephadexG15、Superdexpeptide10／300GL以及RPHPLC等分離技術(shù)對(duì)雙酶法和單酶法制備的鮑魚(yú)性腺酶解小肽進(jìn)行分離純化。通過(guò)I沖一HPLC分析發(fā)現(xiàn)，單酶法和雙酶法得到單一組分疏水性強(qiáng)弱不一樣，單酶法得到單一組分主要屬于疏水性組分，而雙酶法得到的單一組分主要是親水性組分。通過(guò)質(zhì)譜分析雙酶法得到的單一組分分子量為656Da。本研究建立了從鮑魚(yú)性腺制備抗氧化