硒缺乏對雞免疫器官損傷機制的研究.pdf

1、營養(yǎng)微量元素硒是各種生命體正常免疫功能的重要組分之一。硒蛋白和硒在免疫系統(tǒng)中扮演重要角色。硒在雞免疫系統(tǒng)中是非常重要的，它是通過硒蛋白的形式發(fā)揮其生理功能。細胞因子是一類是由種類廣泛的造血和非造血細胞產(chǎn)生的可溶性低分子量的多肽，對細胞的增值、分化、激活和運動具有抑制或提升作用。熱休克蛋白具有保守性，幾乎存在于所有物種體內(nèi)，并熱休克蛋白通常被作為在各種應(yīng)激條件動物（包括禽類）的生物學(xué)標記。自噬是一個在特定細胞和系統(tǒng)中對標靶組分發(fā)揮影響的過

2、程。哺乳動物體內(nèi)的硒蛋白、細胞因子、熱休克蛋白、自噬相關(guān)基因以及免疫系統(tǒng)的超微結(jié)構(gòu)對日糧的硒水平是十分敏感的;但是，人們對于雞脾臟、法氏囊及胸腺中硒蛋白和熱休克蛋白的mRNA表達量、熱休克蛋白的蛋白水平、自噬相關(guān)基因的mRNA和蛋白水平以及硒缺乏對細胞因子、免疫器官的內(nèi)部結(jié)構(gòu)的影響知之甚少。本試驗中，我們測定了硒蛋白Txnrd1、Txnrd2、Txnrd3、Dio1、Dio2、Dio3、GPx1、GPx2、GPx3、Gpx4、Sepp1

3、、Selo、Sep15、Sepx1、Sels、Seli、Selu、Selh和SPS2的mRNA表達量，熱休克蛋白Hsp27、Hsp40、Hsp60、Hsp70和Hsp90的mRNA表達量、Hsp40、Hsp60、Hsp70和Hsp90的蛋白水平，自噬相關(guān)基因LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Beclin1、Dynein、ATG5、TOR1的mRNA表達量、LC3-Ⅱ、Beclin1、Dynein的蛋白水平，細胞因子IL-2、IL-6、IL-8、I

4、L-10、IL-17、IL-1β、IFN-α、IFN-β、IFN-γ和TNF-α的含量，以及雞胸腺、脾臟、法氏囊結(jié)構(gòu)損傷變化。試驗動物被隨機分為2組:缺硒組飼喂含硒量為0.033mg/Kg的日糧，對照組飼喂添加硒至0.15mg/Kg的日糧。實時定量PCR用于檢測15、25、35、45和55日齡雞的硒蛋白、熱休克蛋白、自噬相關(guān)基因的表達水平，并于35、45、55日齡雞熱休克蛋白、自噬相關(guān)基因的蛋白水平是通過western blot技術(shù)檢測

5、分析的，ELISA用于評定細胞因子在15、35、55日齡的含量，另外利用電鏡觀察雞免疫器官的超微結(jié)構(gòu)變化。
　　結(jié)果顯示，與對照組相比，缺硒組雞胸腺、脾臟、法氏囊中的硒蛋白Txnrd1、Txnrd2、Txnrd3、Dio1、Dio2、Dio3、GPx1、GPx2、GPx3、Gpx4、Sepp1、Selo、Sep15、Sepx1、Sels、Seli、Selu、Selh和SPS2的mRNA水平均顯著降低。
　　細胞因子的研究表明

6、在缺硒組胸腺中IL-2、IL-6、IL-17、IL-1β、IFN-α的水平顯著降低，而IL-8、IL-10、IFN-β、IFN-γ和TNF-α的含量顯著升高。在缺硒組法氏囊中IL-2、IL-6、IL-8、 IL-10、IL-17、IL-1β、IFN-α、IFN-β、IFN-γ顯著減少，而TNF-α顯著增加。在缺硒組胸腺中可觀察到IL-2、IL-10、IL-17、IL-1β、IFN-α、IFN-β的水平顯著降低，而IL-6、IL-8、IF

7、N-γ和TNF-α的水平顯著升高。
　　熱休克蛋白mRNA水平的結(jié)果顯示缺硒組胸腺、脾臟、法氏囊中5種熱休克蛋白（Hsp27、Hsp40、Hsp60、Hsp70和Hsp90）均顯著增加。熱休克蛋白的蛋白水平結(jié)果與其mRNA水平結(jié)果一致。
　　自噬相關(guān)基因表達量的結(jié)果表明，與對照組相比，缺硒組脾臟中LC3-Ⅰ、IL3-Ⅱ。Beclin1、Dynein、ATG5、TOR1的mRNA水平和LC3-Ⅱ、Beclin1、Dynein的

8、蛋白水平更高;缺硒組法氏囊中LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Beclin1、Dynein、ATG5、TOR1的mRNA水平，Beclin1和Dynein的蛋白水平增加而LC3-Ⅱ的蛋白水平降低;缺硒組胸腺中LC3-Ⅰ、Beclin1和AGT5的mRNA水平升高，LC3-Ⅱ、Dynein、TOR1的mRNA水平下降，Beclin1的蛋白水平升高而LC3-Ⅱ和Dynein的蛋白水平明顯下降?？稍谌蔽M胸腺、脾臟、法氏囊中觀察到進一步的細胞形態(tài)學(xué)變化