農(nóng)藥2,4-D的多克隆抗體制備及殘留的免疫快速檢測(cè)技術(shù)研究.pdf

1、我國(guó)不僅是個(gè)農(nóng)業(yè)大國(guó)，也是生產(chǎn)和消費(fèi)農(nóng)藥的大國(guó)。2，4-D主要用于禾谷類作物，特別是麥田和玉米田中防除一年生及多年生莎草和雙子葉雜草。并且由于它的廣泛應(yīng)用，已造成了地下水和飲用水的污染。2，4-D及其衍生物普遍存在于人體組織、水、土壤中。2，4-D傳統(tǒng)的檢測(cè)儀器方法主要是氣相色譜，需經(jīng)過(guò)液(一)液萃取、酸化分離、酯化、純化等前處理過(guò)程后才能檢測(cè)。運(yùn)用常規(guī)的儀器分析方法進(jìn)行農(nóng)藥殘留檢測(cè)，不僅時(shí)間長(zhǎng)、費(fèi)用高，而且操作人員易接觸一些有毒的有機(jī)

2、溶劑和化學(xué)試劑。
　　本論文運(yùn)用混合酸酐法將半抗原2，4-D分別與牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)共價(jià)偶聯(lián)，以2，4-D-BSA作免疫原免疫了新西蘭大白兔，獲得2，4-D多克隆抗體。以相應(yīng)的2，4-D-OVA包被96孔酶標(biāo)板的對(duì)抗體進(jìn)行檢測(cè)，得到合成的免疫原產(chǎn)生的抗體效價(jià)分別為1∶12000，并建立間接ELISA，得到其IC50為50ng/mL。優(yōu)化了2，4-D膠體金探針的最佳偶聯(lián)條件，選擇20nm的膠體金顆粒，1mL膠體

3、金最佳抗體偶聯(lián)量為20mL，pH為加入0.1mol碳酸鉀15mL，封閉液的最佳量為60μL，最佳離心速度為10000r/min，制備出2，4-D膠體金試紙條，能夠在1-2min內(nèi)出線，從而得到一種快速檢測(cè)2，4-D的方法，最低檢測(cè)限為10.0ng/mL。
　　制備出了不同的2，4-D抗體標(biāo)記的磁性探針和2，4-D-OVA標(biāo)記的熒光探針，，進(jìn)行比較探討出磁性探針最佳優(yōu)化條件，并繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到最低檢測(cè)限為260mg/mL。在此基