終止子元件在鏈霉菌中的定量表征.pdf

1、合成生物學作為本世紀新興的一門學科，已經向人們展示了其在醫(yī)藥工業(yè)中發(fā)揮的巨大潛力。近年來由于抗生素的濫用使得病原菌的耐藥性一直居高不下，挖掘更多的新化合物成為解決這一困境最為直接的策略。自然界中大部分天然產物來自于放線菌，其中大部分來自鏈霉菌，因此利用合成生物學挖掘鏈霉菌中新的化合物成為近期研究的熱點。相應的鏈霉菌中關于合成生物學元件的研究也有了突破進展，本論文主要在鏈霉菌中終止子元件的篩選、定量表征及應用幾個方面展開研究:
　　

2、一、對鏈霉菌中的終止子元件的篩選和定量表征。以本實驗室在鏈霉菌中啟動子、RBS這些生物學元件量化的研究平臺為基礎，繼續(xù)對其終止子元件進行探索。根據(jù)文獻報道選取委內瑞拉鏈霉菌這一宿主，用含有xy1E基因和neo基因的雙報告系統(tǒng)篩選方法，從人工合成的22個終止子中篩選到12個在委內瑞拉鏈霉菌中工作的終止子。然后對這些終止子的強度進行定量表征，得到強度范圍在4.4～57.8倍范圍內變化的終止子。與此同時還發(fā)現(xiàn)，不同的終止子對其上游基因的表達有

3、不同程度的影響。
　　二、在不同鏈霉菌中對終止子普適性進行驗證及將其應用于阿維菌素的生物合成基因簇中。我們還將其在天藍色鏈霉菌中進行了半定量測試，結果與委內瑞拉中一致，證明篩選到的終止子在鏈霉菌中的普適性。與此同時還用阿維鏈霉菌中自身的番茄紅素基因進行測試，發(fā)現(xiàn)終止子影響上游基因表達量的現(xiàn)象在不同基因間有一定的差異。最后，我們從定量表征的終止子中選取兩個強度比較好的termA47和term5，應用于阿維鏈霉菌中以解決其體內aveR